[in vitroでHAECと角膜上皮細胞の共培養によって誘導される角膜上皮細胞へのヒト羊膜上皮細胞（HAEC）の分化]

in vitroで角膜上皮細胞（CECS）へのヒト羊膜上皮細胞（HAEC）分化の誘導性を調査することを目的。方法HAECは、タイプIIコラゲナーゼとタイプシンによって分離されました。細胞は、TransWellTMの共培養システムでヒトCECによって2週間誘導されました。誘導HAECでのサイトケラチン3+12（CK3+12）、CK14、CK19、増殖細胞核抗原（PCNA）タンパク質の発現は、免疫蛍光染色によって検出されました。CK12、CK14、CK19、P63 mRNAは、蛍光定量的リアルタイムPCR（QRT-PCR）によって検査されました。CK3+12、CK14、CK19、P63タンパク質は、ウエスタンブロッティングによってテストされました。結果は、in vitroでの形態のヒトCECに似ていました。CECとの共培養後、誘導されたHAECはCK3+12、CK14、CK19、およびP63に対して陽性でした。誘導されたHAECSにおけるp63、CK12、CK19、およびCK14 mRNAの相対発現レベルは、それぞれ3.35、6.76、2.42、および1.06倍に増加しました。結論HAECは、CECとの共培養の状態で角膜上皮様細胞に区別できます。HAECの分化の可能性は、組織工学の角膜再建のための種子細胞としてそれを作る可能性があります。

Objective To investigate the feasibility of inducing human amniotic epithelial cells (HAECs) differentiation into corneal epithelial cells (CECs) in vitro. Methods HAECs were isolated by type II collagenase and typsin. The cells were induced by human CECs in a TranswellTM co-culture system for 2 weeks. The expressions of cytokeratin 3+12 (CK3+12), CK14, CK19, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) proteins in the induced HAECs were detected by immunofluorescence staining; CK12, CK14, CK19, P63 mRNAs were examined by fluorescence quantitative real-time PCR (qRT-PCR); CK3+12, CK14, CK19, P63 proteins were tested by Western blotting. Results HAECs were similar to human CECs in morphology in vitro. After co-culture with CECs, the induced HAECs were positive for CK3+12, CK14, CK19 and P63. The relative expression levels of P63, CK12, CK19 and CK14 mRNAs in the induced HAECs increased 3.35, 6.76, 2.42 and 1.06 times, respectively. Conclusion HAECs can differentiate into corneal epithelial-like cells under the condition of co-culture with CECs. The differentiation potential of HAECs may make it as seed cells for tissue engineering corneal reconstruction.