in vivoにおけるCre-ert2の自発的リコンビナーゼ活性

誘導性Cre-ertリコンビナーゼ技術は、遺伝子標的研究に広く使用されています。誘導性CRE-ERTリコンビナーゼの第2世代、Hemizygous B6.129S-Tg（UBC-CRE/ERT2）1EJB/J（以降、Cre-ERT2として略された）、変異したエストロゲン受容体とCRE Recombinaseの融合を促進しました。元のCre-ertよりも効率的かつ具体的です。選択的CREを介した組換えの推定メカニズムは、タモキシフェンの存在下でのみ核に移行し、基底状態の細胞質におけるCre隔離です。レポーターマウス（B6.129（CG）-GT（ROSA）26SOR TM4（ACTB-TDTOMATO、-EGFP）LUO /J）と、CRE-ERT2活性を評価するために酵素1フロックストランスジェニックマウス株を変換するエンドセリンの両方を使用しました。両方の設定で自発的なCREアクティビティを観察しました。意図しないCRE活動は、データ解釈に潜在的に大きな影響を与える交絡因子です。したがって、実験設計における背景CREアクティビティを考慮することが重要です。

Inducible Cre-ERT recombinase technology is widely used for gene targeting studies. The second generation of inducible Cre-ERT recombinase, hemizygous B6.129S-Tg(UBC-cre/ERT2)1Ejb/J (hereafter abbreviated as Cre-ERT2), a fusion of a mutated estrogen receptor and Cre recombinase, was engineered to be more efficient and specific than the original Cre-ERT. The putative mechanism of selective Cre-mediated recombination is Cre sequestration in the cytoplasm in the basal state with translocation to the nucleus only in the presence of tamoxifen. We utilized both a reporter mouse (B6.129 (Cg)-Gt(ROSA)26Sor tm4(ACTB-tdTomato,-EGFP)Luo /J) and endothelin converting enzyme-1 floxed transgenic mouse line to evaluate Cre-ERT2 activity. We observed spontaneous Cre activity in both settings. Unintended Cre activity is a confounding factor that has a potentially large impact on data interpretation. Thus, it is important to consider background Cre activity in experimental design.