ヒト糞便サンプルにおける揮発性および非揮発性有機酸の同時検出と定量化のための超高性能液体クロマトグラフィー軌道質量分析法の検証と適用

シンプルで選択的な超高性能液体クロマトグラフィー - 軌道質質量分析（UHPLC-HR-MS）メソッドが開発され、酢酸、プロピオン、ブタイリック、等酒などの短鎖脂肪酸（SCFA）の同時検出と定量化のために検証されました。ヒト糞便サンプルにおけるヴァレリック、イソヴァリック、2-メチル球状（IS）および乳酸、ピルビック、およびコハク酸。40のサンプルで0.001％のギ酸を含む単純な抽出手順を水中に行いました。抽出物を遠心分離し、勾配溶出を使用してサブ2μmカラムでUHPLC-HR-MSによって分析しました。一方、同じサンプルは、参照法としてGC-FIDおよびHPLC-UVによって分析されました。UHPLC-HR-MSメソッドは83-105％の回復、2.2-8.3％の再現性、2.9-9.4％の中間精度を示しました。。LODとLLOQは、それぞれ0.04-0.23と0.2-0.5μg/mlの範囲でした。SCFAに関して、統計分析は、UHPLC-HR-MSによって得られたデータとGC-FIDによって提供されたデータ（P> 0.05）との間に良好な相関関係を示しました。それどころか、LC-UVデータは、UHPLC-HR-MS決定によって得られたものと一致していませんでした（P <0.05）。私たちの知る限り、これは、UHPLC-HR-MSによる糞便サンプル中のSCFA、乳酸、ピルビック、およびコセンジックの同時抽出と定量化に利用できる最初の方法です。

A simple and selective ultrahigh-performance liquid chromatographic-Orbitrap mass spectrometric (UHPLC-HR-MS) method was developed and validated for the simultaneous detection and quantification of short-chain fatty acids (SCFAs) such as acetic, propionic, butyric, isobutyric, valeric, isovaleric, 2-methyl-butyric (IS) and lactic, pyruvic and succinic acid in human faecal samples. A simple extraction procedure with 0.001% formic acid in water was performed on 40 samples. The extracts were centrifuged and analyzed by UHPLC-HR-MS on a sub-2μm column using gradient elution; meanwhile, the same samples were analyzed by GC-FID and HPLC-UV as reference methods The UHPLC-HR-MS method showed a recovery of 83-105%, a repeatability of 2.2-8.3% and an intermediate precision of 2.9-9.4%. The LOD and LLOQ were in the range of 0.04-0.23 and 0.2-0.5μg/ml, respectively. Regarding the SCFAs, statistical analysis showed a good correlation between the data obtained by UHPLC-HR-MS and those provided by GC-FID (p>0.05). On the contrary, the LC-UV data were not in agreement with those obtained by UHPLC-HR-MS determination (p<0.05). To the best of our knowledge, this is the first method available for the simultaneous extraction and quantification of SCFAs, lactic, pyruvic and succinic in faecal samples by UHPLC-HR-MS.