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MicroRNA(miRNA)は遺伝子発現に重要な役割を果たしており、さまざまな疾患、特に癌の早期診断のためにバイオマーカーとして採用できます。miRNAの検出は依然として挑戦的であり、多くの場合、検出プラットフォームが必要です。ここでは、miR-155の比色検出のための西洋ワラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)支援ハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)が説明されています。ターゲットmiRNAの存在下で、マイクロプレートに固定されたキャプチャプローブは、レポータープローブの3 '端でターゲットmiR-155に挟まれました。5'ENDでRPの別の露出した部分は、信号増幅のために複数のフルオレセインイソチオシアネート(FITC)を備えた二本鎖DNAポリマーを生成するHCRをトリガーしました。最後に、複数のHRP分子は、テトラメチルベンジジン/H2O2系と無色基板による視覚化のために、Microplate上のFITC/抗FITCモノクローナル抗体相互作用を介して長距離DNAナノ構造に固定されました。正確なデータを取得するために、450 nmの吸光度をマイクロプレートリーダーによって計算しました。検出限界は31.8 FM(3.18 AMOL)でした。さらに、このバイオセンサーは高い特異性を示し、標的miRNAと不一致のシーケンスを大幅に区別することができました。また、このアプローチは、血清サンプル中のmiR-155の検出に簡単に適用でき、それにより幅広い用途に帰します。
MicroRNA(miRNA)は遺伝子発現に重要な役割を果たしており、さまざまな疾患、特に癌の早期診断のためにバイオマーカーとして採用できます。miRNAの検出は依然として挑戦的であり、多くの場合、検出プラットフォームが必要です。ここでは、miR-155の比色検出のための西洋ワラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)支援ハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)が説明されています。ターゲットmiRNAの存在下で、マイクロプレートに固定されたキャプチャプローブは、レポータープローブの3 '端でターゲットmiR-155に挟まれました。5'ENDでRPの別の露出した部分は、信号増幅のために複数のフルオレセインイソチオシアネート(FITC)を備えた二本鎖DNAポリマーを生成するHCRをトリガーしました。最後に、複数のHRP分子は、テトラメチルベンジジン/H2O2系と無色基板による視覚化のために、Microplate上のFITC/抗FITCモノクローナル抗体相互作用を介して長距離DNAナノ構造に固定されました。正確なデータを取得するために、450 nmの吸光度をマイクロプレートリーダーによって計算しました。検出限界は31.8 FM(3.18 AMOL)でした。さらに、このバイオセンサーは高い特異性を示し、標的miRNAと不一致のシーケンスを大幅に区別することができました。また、このアプローチは、血清サンプル中のmiR-155の検出に簡単に適用でき、それにより幅広い用途に帰します。
MicroRNAs (miRNAs) have key roles in gene expression and can be employed as biomarkers for early diagnosis of various diseases, especially cancers. Detection of miRNAs remains challenging and often requires detection platforms. Here, a horseradish peroxidase (HRP)-assisted hybridization chain reaction (HCR) for colorimetric detection of miR-155 was described. In the presence of target miRNA, the capture probe immobilized on the microplate sandwiched the target miR-155 with the 3' end of the reporter probe. Another exposed part of the RP at the 5'end triggered HCR producing double-stranded DNA polymers with multiple fluorescein isothiocyanates (FITC) for signal amplification. Finally, multiple HRP molecules were immobilized onto the long-range DNA nanostructures through FITC/anti-FITC monoclonal antibody interactions on the microplate for visualization by tetramethylbenzidine/H2O2 system and the colorless substrate turned into the blue product. To obtain accurate data, the absorbance at 450 nm was calculated by microplate reader. The detection limit was 31.8 fM (3.18 amol). Furthermore, this biosensor showed high specificity and was able to discriminate sharply between target miRNA and mismatched sequences. And this approach could be easily applied to the detection of miR-155 in serum sample, thereby ascribing it for a wide application.
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