マルチプレックスTAQMAN®アッセイを使用したチクングニヤウイルス、デング熱ウイルス、ヒトの病原性レプトスピラゲノムの同時検出

背景：2005年から2006年には、南西インド洋諸島でチクングニア病の主要な流行が発生しました。Reunion Islandでは、Chikungunya感染に関連する症状の大きさは高く、人口の血清学的有病率の38％以上がありました。この流行は、ベクターが世界的に配布されているため、再会島の住民や他の場所の住民のための新興のアルボウイルス疾患の潜在的な脅威を示しています。センチネル監視ネットワークが設置され、38°Cを超える発熱に関連する新興病原体を検出し、既知の病因の原因がない場合に設定されました。レプトスピラ症は、レプトスピラ属の病原性のスピロヘータによって引き起こされ、再会島で大きな懸念を抱える風土病で再発性の季節疾患です。潜在的に感染した患者を正確に診断し、新たな病原体の存在について医療当局に助言するために、これら3つの病原体を区別できる迅速な診断検査が必要でした。 方法：一方的なマルチプレックスリアルタイムPCRアッセイが開発され、同時にチクングニヤとデング熱ウイルス、レプトピラルDNAのRNAを、日常的な診断使用のために良好なパフォーマンスで検出できました。 結果：すでに公開されているシンプレックスプロトコルは、コスト効率を改善するために小さな反応量でセットアップされたTriplexアッセイを実装するための重要な修正で使用されました。 結論：このアプローチにより、実験室での診断能力が向上しました。私たちは、コスト削減に対して検証され、価値のあるマルチプレックスアプローチを確立し、3つの公衆衛生上の懸念の病原体の同時検出を行いました。

BACKGROUND: In 2005-2006 a major epidemics of Chikungunya disease occurred in South-West Indian Ocean islands. In Reunion Island, the magnitude of Chikungunya infection related symptoms was high and with over 38% of serological prevalence in the population. This epidemics illustrated the potential threat of emerging arboviral diseases for inhabitants of Reunion Island and elsewhere since vectors are worldwide distributed. A sentinel surveillance network was set-up to detect emerging pathogens associated with fever over 38 °C and in the absence of known etiologic causes. Leptospirosis is caused by a pathogenic spirochete of the Leptospira genus and is an endemic and recurrent seasonal disease of great concern in Reunion Island. To accurately diagnose potentially infected patients and to advise Health authorities on the presence of emerging pathogens, a rapid diagnostic test was needed that could differentiate between these 3 pathogens. METHODS: A one-step multiplex real-time PCR assay was developed that can simultaneously detect RNA of Chikungunya and Dengue viruses and leptospiral DNA with good performance for a routine diagnostic use. RESULTS: Simplex protocols already published were used with key modifications to implement a triplex assay which was set-up with a small reaction volume to improve cost efficiency. CONCLUSIONS: This approach has enabled greater diagnostic capacity in our laboratory. We established a multiplex approach validated and valuable for cost savings, and with the concurrent detection of 3 pathogens of public health concern.