in vitroでのヒト遠位肺上皮細胞における乳がん抵抗性タンパク質（BCRP/ABCG2）の発現と活性

目的：乳がん抵抗性タンパク質（BCRP/ABCG2）は、以前にヒト肺の高発現レベルで同定されています。しかし、肺上皮における輸送体の細胞内局在と機能的活性は、依然としてあまり調査されていません。このプロジェクトの目的は、初代培養における新たに分離されたヒト肺胞上皮型2型（AT2）および1型様（AT1様）細胞のBCRP発現と活性を研究し、これらの発見をNCI-H441細胞株から得たデータと比較することでした。 方法：AT2およびAT1様細胞およびNCI-H441細胞のさまざまな通路でのBCRP発現レベルは、Q-PCRおよび免疫ブロットを使用して決定されました。トランスポーターの局在は、共焦点レーザー走査顕微鏡によって確認されました。BCRP基質BODIPY FLプラゾシンと阻害剤KO143を使用した排水および輸送研究を実施して、異なる細胞モデルのBCRP活性を評価しました。 結果：AT2からAT1様の表現型への変換中にBCRP発現が減少しました。空気液体界面またはサブマーでNCI-H441細胞を培養しても、BCRPの存在量は変化しませんでしたが、BCRPレベルは通過数とともに増加しました。BCRPは、NCI-H441細胞の頂端膜とサイトゾルに局在していました。一次細胞では、タンパク質が主に核で発見されました。機能的研究は、発現データと一致していました。 結論：BCRPは、AT2およびAT1様細胞で異なる表現を異なり、後者の細胞では存在量と活性が低くなります。核BCRPは、遠位肺上皮で転写的な役割を果たす可能性があります。NCI-H441細胞では、BCRPは頂端細胞膜で発現し、その活性は局在パターンと一致しています。

PURPOSE: Breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2) has previously been identified with high expression levels in human lung. The subcellular localisation and functional activity of the transporter in lung epithelia, however, remains poorly investigated. The aim of this project was to study BCRP expression and activity in freshly isolated human alveolar epithelial type 2 (AT2) and type 1-like (AT1-like) cells in primary culture, and to compare these findings with data obtained from the NCI-H441 cell line. METHODS: BCRP expression levels in AT2 and AT1-like cells and in different passages of NCI-H441 cells were determined using q-PCR and immunoblot. Transporter localisation was confirmed by confocal laser scanning microscopy. Efflux and transport studies using the BCRP substrate BODIPY FL prazosin and the inhibitor Ko143 were carried out to assess BCRP activity in the different cell models. RESULTS: BCRP expression decreased during transdifferentiation from AT2 to AT1-like phenotype. Culturing NCI-H441 cells at an air-liquid interface or submersed did not change BCRP abundance, however, BCRP levels increased with passage number. BCRP was localised to the apical membrane and cytosol in NCI-H441 cells. In primary cells, the protein was found predominantly in the nucleus. Functional studies were consistent with expression data. CONCLUSIONS: BCRP is differently expressed in AT2 and AT1-like cells with lower abundance and activity in the latter ones. Nuclear BCRP might play a transcriptional role in distal lung epithelium. In NCI-H441 cells, BCRP is expressed in apical cell membranes and its activity is consistent with the localisation pattern.