完全なフロイントのアジュバントは、免疫応答の開始中にIL-6産生を促進することにより、実験的自己免疫性心筋炎を誘導します

はじめに：抗原で乳化した完全なフロイントのアジュバント（CFA）は、動物モデルに自己免疫疾患を誘導するために広く使用されている方法ですが、免疫応答に対するCFAの寄与はよく理解されていません。雄マウスの実験的自己免疫心筋炎（EAM）におけるCFAの有効性を、実験的自己免疫性心筋炎（EAM）におけるTitermax Gold Adguvant（TMAX）を不完全なフロイント（IFA）またはTitermax Gold Adguvant（TMAX）と比較しました。 方法：EAMは、0および7日にCFA、IFA、またはTMAXでの心筋誘発性ペプチドの注射により、A/J、BALB/C、およびIL6KO BALB/Cの雄マウスで誘導されました。EAMの重症度は、21日目の組織学によって分析されました。さらに、21日目に特定のフローサイトメトリーの結果が評価されました。 結果：0と7日の両方でCFAおよび心筋誘発性ペプチドで免疫したマウスのみが、組織学で測定されたように実質的な心筋炎を発症しました。CFA予防接種後3日後に脾臓でIL6の大幅な増加レベルが観察されました。21日目の脾臓と心臓では、IFAまたはTMAX免疫動物と比較して、CFA免疫マウスの骨髄細胞の拡大がありました。IFA免疫時の組換えIL-6は、マウスのEAMに対する部分的に復元されました。また、最初の予防接種時に-1〜2日目に組換えIL-6ノックアウトマウスを組換えIL-6ノックアウトマウスを、IL-6を完全に回復し、IL-6の要件が一次免疫と一致することを示しています。リンパ節のAPC集団を調べる免疫化部位を排出するリンパ節の検査により、IL-6がEAMのCFA依存性に寄与したことが証明されました。 結論：A/JマウスとBALB/Cマウスの両方にEAMを誘導するには、Myocarditogenicペプチドで2回使用されるCFAが2回必要です。IFAとTitermaxは抗体応答を誘導しますが、CFAのみが自己抗原特異的応答を優先的に誘導しました。CFAは、心臓と脾臓の単球を拡大します。IL-6シグナル伝達は、EAMを誘導するために、一次予防接種の周りの短いウィンドウ中に必要です。さらに、EAMに対するIL-6欠損マウス抵抗性は、最初の予防接種の周りにIL-6を注入することにより逆転する可能性があります。IL-6は、樹状細胞と単球の集団を拡大し、最終的にCFA免疫マウスにおける堅牢なT細胞駆動型免疫応答につながります。

INTRODUCTION: Complete Freund's Adjuvant (CFA) emulsified with an antigen is a widely used method to induce autoimmune disease in animal models, yet the contribution of CFA to the immune response is not well understood. We compared the effectiveness of CFA with Incomplete Freund's Adjuvant (IFA) or TiterMax Gold Adjuvant (TMax) in experimental autoimmune myocarditis (EAM) in male mice. METHODS: EAM was induced in A/J, BALB/c, and IL6KO BALB/c male mice by injection of the myocarditogenic peptide in CFA, IFA, or TMax on days 0 and 7. EAM severity was analyzed by histology on day 21. In addition, specific flow cytometry outcomes were evaluated on day 21. RESULTS: Only mice immunized with CFA and myocarditogenic peptide on both days 0 and 7 developed substantial myocarditis as measured by histology. We observed a significantly increased level of IL6 in the spleen 3 days after CFA immunization. In the spleen and heart on day 21, there was an expansion of myeloid cells in CFA-immunized mice, as compared to IFA or TMax-immunized animals. Recombinant IL-6 at the time of IFA immunization partially restored susceptibility of the mice to EAM. We also treated EAM-resistant IL-6 knockout mice with recombinant IL-6 around the time of the first immunization, on days -1 to 2, completely restoring disease susceptibility, showing that the requirement for IL-6 coincides with primary immunization. Examining APC populations in the lymph node draining the immunization site evidenced the contribution of IL-6 to the CFA-dependence of EAM was through controlling local dendritic cell (DC) trafficking. CONCLUSIONS: CFA used with myocarditogenic peptide twice is required to induce EAM in both A/J and Balb/c mice. Although IFA and TiterMax induce antibody responses, only CFA preferentially induced autoantigen-specific responses. CFA expands monocytes in the heart and in the spleen. IL-6 signaling is required during short window around primary immunization to induce EAM. In addition, IL-6 deficient mice resistance to EAM could be reversed by injecting IL-6 around first immunization. IL-6 expands dendritic cell and monocytic populations and ultimately leads to a robust T-cell driven immune response in CFA immunized mice.