Incp-2メガプラスミドの完全なヌクレオチド配列は、緑膿菌における推定新規Blavim-2ハーブリングトランスポゾンを含むモザイクアーキテクチャを明らかにします

目的：Pseudomonas aeruginosaでは、BLA VIM-2は主に染色体の位置に関連しており、プラスミド骨格とはめったに関連していません。これまで、この種では3つの完全なBLA VIM -2を炭car化するプラスミド配列のみが記載されていました。ここでは、P。aeruginosaに記載されている最初のBLA VIM -2 carryメガプラスミドであるPJB37のモジュラー構造を探ります。 方法：プラスミドPJB37の完全なヌクレオチド配列は、イルミナhiseqで決定され、スペードによるde novoアセンブリ、rastによる注釈、抗菌薬耐性遺伝子と毒性因子の検索を測定しました。共役アッセイを実施しました。 結果：メガプラスミドPJB37（長さ464804 bp、57.2％のGC含有量）が構成されています。共役移動領域（TRAF、TRAG、VIRD2、TRBBCDEJLFGI遺伝子）;TN 6356、新しい推定BLA VIM -2-キャリートランスポゾン。重金属（水銀およびテルライト）抵抗性オペロン。毒性遺伝子の兵器庫。プラスミドPJB37は、緑膿菌PAO1の自発性リファンピシン耐性変異体に結合することにより移動できました。ここでは、BLA VIM -2 -Harbouring In58 Integronは、ここではTN 6356という名前の新しい複雑な転置可能な構造に関連しており、IN58がこの要素の挿入によって獲得される可能性が高いことを示唆しています。 結論：PJB37 Incp-2メガプラスミドによって示されたモザイクの配置は、シュードモナスの広範なプラスミドプラットフォームにおける異なる遺伝的要素の広大なアセンブリの可能性を強調し、細菌の適応と進化に関する新しい洞察を提供します。

OBJECTIVES: In Pseudomonas aeruginosa , bla VIM-2 has been mostly associated with a chromosomal location and rarely with a plasmid backbone. Until now, only three complete bla VIM-2 -carrying plasmid sequences have been described in this species. Here we explore the modular structure of pJB37, the first bla VIM-2 -carrying megaplasmid described in P. aeruginosa . METHODS: The complete nucleotide sequence of plasmid pJB37 was determined with an Illumina HiSeq, with de novo assembly by SPAdes, annotation by RAST and searching for antimicrobial resistance genes and virulence factors. Conjugation assays were conducted. RESULTS: Megaplasmid pJB37 (464 804 bp long and GC content of 57.2%) comprised: an IncP-2 repA-oriV-parAB region; a conjugative transfer region ( traF , traG , virD2 and trbBCDEJLFGI genes); Tn 6356 , a new putative bla VIM-2 -carrying transposon; heavy metal (mercury and tellurite) resistance operons; and an arsenal of virulence genes. Plasmid pJB37 was transferable by conjugation to a spontaneous rifampicin-resistant mutant of P. aeruginosa PAO1. Here, a bla VIM-2 -harbouring In58 integron was associated with a new complex transposable structure, herein named Tn 6356 , suggesting that In58 was most likely acquired by insertion of this element. CONCLUSIONS: The mosaic arrangement exhibited by the pJB37 IncP-2 megaplasmid, which highlights the vast assembly potential of distinct genetic elements in a Pseudomonas widespread plasmid platform, gives new insights into bacterial adaptation and evolution.