好中球細胞外トラップは、抗炎症マクロファージとのIL-4/GM-CSF誘導単球分化を再プログラムします

単球由来の樹状細胞（MO-DC）は、リーシュマニア寄生虫に対するTH1保護免疫応答の発生に不可欠です。IL-4およびGM-CSFは、樹状細胞（DC）へのヒト単球の分化を駆動することがよく知られています。ここでは、好中球細胞外トラップ（NET）がこのプロセスを破壊するかどうかを調査します。リーシュマニアのプロマスティゴテによるヒト好中球活性化後に生成された網が豊富な上清を単球に加え、マクロファージおよびDCS表現型、シトカイン産生、および寄生虫殺害に関連する分子の発現によって監視された分化を監視しました。IL-4/GM-CSF処理単球にNETを追加すると、DCに完全に分化することが妨げられたことがわかりました。ネットをDNaseで処理した場合、またはトラップをフィルタリングすることにより、効果は観察されませんでした。さらに、NETは単球と密接に相互作用し、IL-4受容体の発現をダウンレギュレートし、それがDCへの単球の完全な分化を破壊します。好中球エラスターゼ阻害は、単球をDCS分化に救助します。CD68、CD32、およびCD163の発現の増加によって観察されるように、IL-4/GM-CSFおよびNETSをマクロファージに分化したNETSで培養した単球、およびCD80の発現の減少によって観察されました。さらに、IL-4/GM-CSF処理単球への正味の追加により、これらの細胞はリーシュマニアの寄生虫を殺すのに効率が低くなりました。全体として、我々の結果は、NETがIL-4/GM-CSF駆動型分化を妨害し、抗炎症マクロファージにMo-DCの生成を再プログラミングすることを示しています。

Monocyte-derived dendritic cells (mo-DCs) are essential for the development of a Th1 protective immune response against Leishmania parasites. It is well known that IL-4 and GM-CSF drive differentiation of human monocytes to dendritic cells (DCs). Here, we investigate if neutrophil extracellular traps (NETs) disrupt this process. NETs-enriched supernatants, generated after human neutrophil activation by Leishmania promastigotes, were added to monocytes and differentiation monitored by expression of molecules associated with macrophage and DCs phenotypes, cytokine production, and parasite killing. We found that NETs addition to IL-4/GM-CSF-treated monocytes prevented then to fully differentiate into DCs. No effect was observed if NETs were treated with DNase or by filtering the traps. Moreover, NETs closely interact with monocytes and downregulate the expression of the IL-4 receptor, which in turn disrupts fully differentiation of monocytes into DCs. Neutrophil elastase inhibition rescues the monocytes to DCs differentiation. Monocytes cultured with IL-4/GM-CSF and NETs differentiated into macrophages, as observed by the increased expression of CD68, CD32, and CD163, and decreased expression of CD80. Moreover, NET addition to IL-4/GM-CSF-treated monocytes rendered these cells less efficient to kill Leishmania parasites. Altogether, our results show that NETs interfere with IL-4/GM-CSF driven differentiation, reprogramming the generation of mo-DCs to an anti-inflammatory macrophage.