操作されたPseudomonas chlororaphis GP72によるトランス-2,3-ジヒドロ-3-ヒドロキシアントラニル酸の産生

トランス-2,3-ジヒドロ-3-ヒドロキシアントラニル酸（DHHA）は、キラル材料と非自然ペプチドの合成に使用できる環状β-アミノ酸です。この研究の目的は、フェナジン-1-カルボン酸と2-ヒドロキシフェナジンを産生する非病原性株であるPseudomonas chlororaphis Gp72を工学することにより、DHHAを蓄積することでした。最初に、PHZF欠失変異体DA1が構築され、1.91 g/L DHHAが生成されました。さらに、RPEAとPYKFが破壊され、その後PPSAとTKTAがDA1株で共発現されました。得られたひずみDA4は、DHHA濃度を4.98 g/Lに増加させました。これはDA1の濃度よりも2.6倍です。DHHA産生に対するグルコース、グリセロール、L-トリプトファン、およびFe3+の添加の効果も調査されました。株DA4株は、12 g/Lグルコースと3 mM Fe3+の存在下で培地で7.48 g/LのDHHAを生成しました。これは、元の発酵条件のひずみよりも1.5倍高かった。これらの結果は、DHHAプロデューサーとしてのP. chlororaphis Gp72の可能性を示しています。

Trans-2,3-dihydro-3-hydroxyanthranilic acid (DHHA) is a cyclic β-amino acid that can be used for the synthesis of chiral materials and nonnatural peptides. The aim of this study was to accumulate DHHA by engineering Pseudomonas chlororaphis GP72, a nonpathogenic strain that produces phenazine-1-carboxylic acid and 2-hydroxyphenazine. First, the phzF deletion mutant DA1 was constructed, which produced 1.91 g/L DHHA. Moreover, rpeA and pykF were disrupted and then ppsA and tktA were co-expressed in strain DA1. The resulting strain DA4 increased DHHA concentration to 4.98 g/L, which is 2.6-fold than that of DA1. The effects of the addition of glucose, glycerol, L-tryptophan, and Fe3+on DHHA production were also investigated. Strain DA4 produced 7.48 g/L of DHHA in the culture medium in the presence of 12 g/L glucose and 3 mM Fe3+, which was 1.5-fold higher than the strain in the original fermentation conditions. These results indicate the potential of P. chlororaphis GP72 as a DHHA producer.