CHO細胞におけるFurin-2A媒介モノクローナル抗体分泌に対するシグナルペプチドの影響

研究では、哺乳類細胞における高モノクローナル抗体（mAb）発現にFurin-2Aペプチドを使用する利点が示されていました。シグナルペプチドがFurin-2Aを介したmAb分泌にどのように影響するかはまだ調査されていません。CHO細胞のFurin-2AベースのトリシストロニックベクターにおけるMAB分泌に対するシグナルペプチドの影響を評価します。各トリシストロニックベクターでは、重鎖（HC）が最初のシストロンとして配置され、続いてフリン認識シーケンス、2Aペプチド、軽鎖（LC）、内部リボソーム侵入部位（IRES）、およびジヒドロ葉酸レンダクターゼ（DHFR）が続きます。HCおよびLCのシグナルペプチドは、異なるベクトルで除去または変更されます。HC遺伝子とLC遺伝子の両方にシグナルペプチドを含むベクターは、最高のmAb分泌レベルを与えます。HCまたはLCのいずれかで異なる強度を持つ信号ペプチドに変更しても、MAB分泌レベルは変わりません。LC遺伝子のシグナルペプチドが除去されたが、HCおよびLC遺伝子の両方にシグナルペプチドを含むベクターと比較して低いレベルでIgGが分泌されます。HCシグナルペプチドを除去すると、下流のLCがシグナルペプチドを運ぶかどうかに関係なく、IgG分泌はほとんどありません。Furin Cleavageサイトを除去しても、2Aシーケンスを除去しながらMAB分泌レベルには影響しません。ここに存在する結果は、哺乳類細胞でmAbを発現するためのFurin-2Aベースのベクターの設計に有益です。

Studies had shown the benefits of using furin-2A peptides for high monoclonal antibody (mAb) expression in mammalian cells. How signal peptides affect furin-2A mediated mAb secretion has yet to be investigated. The impact of signal peptides on mAb secretion in furin-2A based tricistronic vectors in CHO cells is evaluated. In each tricistronic vector, heavy chain (HC) is arranged as the first cistron and followed by a furin recognition sequence, a 2A peptide, light chain (LC), an internal ribosome entry site (IRES), and dihydrofolate reductase (DHFR). Signal peptides for HC and LC are either removed or changed in different vectors. The vectors with signal peptides on both HC and LC genes gIve the highest mAb secretion levels. Changing to signal peptides with different strengths on either HC or LC do not change the mAb secretion level. IgG is still secreted when the signal peptide on the LC gene is removed but at a lower level compared to the vectors containing signal peptides on both HC and LC genes. Removing the HC signal peptide results in almost no IgG secretion regardless of whether the downstream LC carries any signal peptide. Removing the furin cleavage site does not affect mAb secretion levels while removing the 2A sequence results in low mAb secretion. The results present here will be beneficial for designing furin-2A based vectors for expressing mAb in mammalian cells.