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常染色体劣性多嚢胞性腎臓病（Omim 263200）は、単一の遺伝子PKHD1の変異によって引き起こされる腎臓と肝臓の深刻な状態です。この遺伝子は、in vitro研究によってノッチ様処理を受けることが示された大きなタンパク質であるフィブロシスチン/ポリダクチン（FPC、PD1）をコードしています。その細胞質尾部は、繊毛標的配列、核局在化シグナル、およびポリシスチン-2結合ドメインを含むと報告されており、切断後に核への輸送と考えられています。現在、C末端に隣接するLOX P部位とともに、C末端に「ノックイン」されたトリプルHAエピトープを備えた新しいマウスラインを報告します。トリプルHAエピトープは、表現型によってアッセイされた機能効果はなく、フィブラシスチンのin vivo追跡を可能にします。HAタグを使用して、組織内の以前に予測されたフィブロシシスチン切断産物を識別しました。さらに、ポリシスチン-2は腎臓サンプル中のフィブラシスチンと共沈むことができないことがわかりました。抗HA抗体を用いた免疫蛍光研究は、フィブロシスチンが主に腎臓、胆管、および膵管の頂点に存在することを示しており、ゴルジ体と部分的に重複しています。以前の研究とは対照的に、一次繊毛の内因性タンパク質はマウス組織では検出できませんでした。CREを介した欠失後、ホモ接合PKHD1Δ67マウスは完全に正常です。したがって、PKHD1FLOX67HAは、C末端を含むPKHD1由来の生成物を追跡する有効なモデルです。重要なことに、核局在化シグナルとポリシスチン-2結合ドメインを含むエクソン67は、モデルのフィブロシシスチン機能には不可欠ではありません。
常染色体劣性多嚢胞性腎臓病（Omim 263200）は、単一の遺伝子PKHD1の変異によって引き起こされる腎臓と肝臓の深刻な状態です。この遺伝子は、in vitro研究によってノッチ様処理を受けることが示された大きなタンパク質であるフィブロシスチン/ポリダクチン（FPC、PD1）をコードしています。その細胞質尾部は、繊毛標的配列、核局在化シグナル、およびポリシスチン-2結合ドメインを含むと報告されており、切断後に核への輸送と考えられています。現在、C末端に隣接するLOX P部位とともに、C末端に「ノックイン」されたトリプルHAエピトープを備えた新しいマウスラインを報告します。トリプルHAエピトープは、表現型によってアッセイされた機能効果はなく、フィブラシスチンのin vivo追跡を可能にします。HAタグを使用して、組織内の以前に予測されたフィブロシシスチン切断産物を識別しました。さらに、ポリシスチン-2は腎臓サンプル中のフィブラシスチンと共沈むことができないことがわかりました。抗HA抗体を用いた免疫蛍光研究は、フィブロシスチンが主に腎臓、胆管、および膵管の頂点に存在することを示しており、ゴルジ体と部分的に重複しています。以前の研究とは対照的に、一次繊毛の内因性タンパク質はマウス組織では検出できませんでした。CREを介した欠失後、ホモ接合PKHD1Δ67マウスは完全に正常です。したがって、PKHD1FLOX67HAは、C末端を含むPKHD1由来の生成物を追跡する有効なモデルです。重要なことに、核局在化シグナルとポリシスチン-2結合ドメインを含むエクソン67は、モデルのフィブロシシスチン機能には不可欠ではありません。
Autosomal recessive polycystic kidney disease (OMIM 263200) is a serious condition of the kidney and liver caused by mutations in a single gene, PKHD1. This gene encodes fibrocystin/polyductin (FPC, PD1), a large protein shown by in vitro studies to undergo Notch-like processing. Its cytoplasmic tail, reported to include a ciliary targeting sequence, a nuclear localization signal, and a polycystin-2 binding domain, is thought to traffic to the nucleus after cleavage. We now report a novel mouse line with a triple HA-epitope "knocked-in" to the C-terminus along with lox P sites flanking exon 67, which encodes most of the C-terminus (Pkhd1Flox67HA). The triple HA-epitope has no functional effect as assayed by phenotype and allows in vivo tracking of Fibrocystin. We used the HA tag to identify previously predicted Fibrocystin cleavage products in tissue. In addition, we found that Polycystin-2 fails to co-precipitate with Fibrocystin in kidney samples. Immunofluorescence studies with anti-HA antibodies demonstrate that Fibrocystin is primarily present in a sub-apical location the in kidney, biliary duct, and pancreatic ducts, partially overlapping with the Golgi. In contrast to previous studies, the endogenous protein in the primary cilia was not detectable in mouse tissues. After Cre-mediated deletion, homozygous Pkhd1Δ67 mice are completely normal. Thus, Pkhd1Flox67HA is a valid model to track Pkhd1-derived products containing the C-terminus. Significantly, exon 67 containing the nuclear localization signal and the polycystin-2 binding domain is not essential for Fibrocystin function in our model.
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