N-（エトキシカルボニル）-2-エトキシ-1,2-ジヒドロキノリンとのニューロスポラクラッサ血漿膜H+-ATPaseとの相互作用

カルボキシル基を活性化試薬N-（エトキシカルボニル）-2-エトキシ-1,2-ジヒドロキノリン（EEDQ）は、少なくとも3つの異なる方法でニューロスポラ血漿膜H+-ATPaseと相互作用します。この試薬は、いくつかの濃度のEEDQで擬似第1次速度である動態とATP加水分解を不可逆的に阻害し、これらのデータの適切な変換は、1 molのEEDQがH+-ATPaseの1モルを不活性化することを示唆しています。阻害は、おそらくATPaseカルボキシル基の活性化と、それに続いてATPaseポリペプチド鎖の微小求核官能基による求核攻撃を行い、分子内クロスリンクをもたらします。酵素は、バナジン酸の存在下でのMGATPによるEEDQ阻害に対して保護されています。これは、以前に酵素リン酸化と脱リン酸化反応の遷移状態に似ていると思われる立体構造でH+-ATPaseを「ロック」することが示されたリガンドの組み合わせであり、しかし、脱リン酸化反応に似ていますが、基質類似体MGADPによって保護されていません。これは、EEDQ依存性抑制性阻害性限度等分子内架橋反応に関与する残基の1つまたは両方が、通常、ATPのガンマホスホリル基の移動に関与するという概念と一致しています。そうする人の近く。ATPaseは、EEDQ依存反応において外因性の求核性[14C]グリシンエチルエステルによっても標識され、MGATPとバナジン酸の存在下で標識が減少します。ただし、ATPaseと標識された[14C]グリシンエチルエステルのペプチドマップは、標識がEEDQ阻害反応といかなる方法でも関連していないことを示しています（250語で切り捨てられた抽象）

The carboxyl group activating reagent N-(ethoxycarbonyl)-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline (EEDQ) interacts with the Neurospora plasma membrane H+-ATPase in at least three different ways. This reagent irreversibly inhibits ATP hydrolysis with kinetics that are pseudo-first-order at several concentrations of EEDQ, and an appropriate transform of these data suggests that 1 mol of EEDQ inactivates 1 mol of the H+-ATPase. Inhibition probably involves activation of an ATPase carboxyl group followed by a nucleophilic attack by a vicinal nucleophilic functional group in the ATPase polypeptide chain, resulting in an intramolecular cross-link. The enzyme is protected against EEDQ inhibition by MgATP in the presence of vanadate, a combination of ligands that has previously been shown to "lock" the H+-ATPase in a conformation that presumably resembles the transition states of the enzyme phosphorylation and dephosphorylation reactions, but is not protected by the substrate analogue MgADP, which is consistent with the notion that one or both of the residues involved in the EEDQ-dependent inhibitory intramolecular cross-linking reaction normally participate in the transfer of the gamma-phosphoryl group of ATP, or are near those that do. The ATPase is also labeled by the exogenous nucleophile [14C]glycine ethyl ester in an EEDQ-dependent reaction, and the labeling is diminished in the presence of MgATP plus vanadate. However, peptide maps of [14C]glycine ethyl ester labeled ATPase demonstrate that the labeling is not related to the EEDQ inhibition reaction in any simple way.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)