pichia pichia pastorisでの発現を強化するためのリパーゼアイソザイムの共発現

非標識：異なるソースからのアイソザイムの共発現を通じて、Pichia pichia in pichia in pichiaの全体的な発現レベルを高める。P. pastorisのリパーゼアイソザイムの共発現効率を決定するために、いくつかのタイプの共発現方法が構築されました。結果は、リパーゼアイソザイムのKex2を介した共発現が根型Mieheiリパーゼ（RML）とThermyces lanuginosus Lipase（TLL）を同時に発現し、GS-RMK-KTLが306・U ML-1の平均リパーゼ活性を示すことを同時に発現できることを示しました。、GS-RMLおよびGS-KTL（2・89および300・59 u ml-1）P。pastorisで独立して発現し、両方の合計（303・48 uml-1）であり、全体的な組換え発現を増加させる際にKex2によって媒介されるアイソザイム共発現の可能性を意味しますが、P. pastorisにおけるRMLの低い組換え発現は、アイソザイム共発現株におけるリパーゼ発現に対する全体的な増加効果を弱めました。さらに、融合アイソザイムは正常に発現しましたが、リパーゼ活性が低い。さらに、2aペプチドはリパーゼアイソザイムの共発現と分泌をうまく媒介する可能性がありますが、2aペプチドの下流のTLLの発現に深刻な影響を与えました。 研究の重要性と影響：低生産レベルは、酵素の価格を下げ、バイオ触媒としての業界での応用を拡大するための制限要因の1つです。この研究は、同じ反応を触媒する全体的なリパーゼアイソザイムの発現レベルを高めるために、pichia pastorisでリパーゼアイソザイム共発現戦略の開発に焦点を当てています。リパーゼアイソザイムのKEX2を介した共発現戦略は、潜在的にアイソザイム発現を促進する可能性があり、アイソザイムの共発現は、組換えアイソザイム発現を改善し、これらの混合酵素の生成および応用価格を生体触媒としての産生および応用価格を低下させるための新しい方向を提供する可能性があります。

UNLABELLED: To enhance the overall expression level of lipase isozymes which catalyse the same reaction in Pichia pastoris through co-expression of isozymes from different sources; several types of co-expression ways were constructed to determine the co-expression efficiencies of lipase isozymes in P. pastoris. The results showed that the Kex2-mediated co-expression of lipase isozymes could express Rhizomucor miehei lipase (RML) and Thermomyces lanuginosus lipase (TLL) simultaneously, and GS-RMk-kTL displayed an average lipase activity of 306·91 U ml-1 , higher than GS-RML and GS-kTL (2·89 and 300·59 U ml-1 ) expressed independently in P. pastoris, and the sum of both (303·48 U ml-1 ), implying the potential of isozyme co-expression mediated by Kex2 in increasing the overall recombinant expression, but the low recombinant expression of RML in P. pastoris weakened the overall increasing effect on lipase expression in the isozyme co-expression strains. In addition, the fusion isozymes were successfully expressed, but with low lipase activities. Furthermore, 2A peptide could successfully mediate the co-expression and secretion of lipase isozymes, but it seriously affected the expression of TLL downstream of 2A peptide. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The low production level is one of the limitation factors for decreasing the prices of enzymes and expanding their application in industry as the biocatalysts. This research focuses on developing lipase isozyme co-expression strategies in Pichia pastoris to enhance the expression level of overall lipase isozymes which catalyse the same reaction. The Kex2-mediated co-expression strategy of lipase isozymes could potentially enhance the overall isozyme expression, and isozyme co-expression might provide a new direction for improving the recombinant isozyme expression, and decreasing the production and application prices of these mixed enzymes as biocatalysts.