シロイヌナズナthaliana acyl-coa結合タンパク質Acbp6は、プラスモデスマタに位置するタンパク質pdlp8と相互作用する

シロイヌナズナでは、ATACBP1からATACBP6に指定された6つのアシルCoA結合タンパク質（ACBPS）が、植物のストレスと発達に関連するさまざまなイベントで機能することが確認されています。10-kDa ATACBP6はこのタンパク質ファミリーで最小であり、組換えATACBP6はアシルCoAエステルとホスファチジルコリンに結合することによりin vitroで脂質と相互作用します。免疫電子顕微鏡で抗ATACBP6抗体を使用して、シロイヌナズナの師部にATACBP6を局在させました。プラズモデスマタにおける免疫金粒の検出は、ATACBP6がプラズモデスマタを介してコンパニオン細胞からふるい要素に移動できることを示唆しました。ATACBP6は、膜ベースの相互作用分析で特定されており、プラスモデスマタ局在タンパク質、PDLP8、ATACBP6-PDLP8相互作用の潜在的なタンパク質パートナーであると同定されています。ここでは、等温滴定熱量測定、およびプルダウンおよびバイモルの蛍光補完アッセイを利用して、ここでは調査されました。bifc）。特に、BIFCデータは、ATACBP6-PDLP8相互作用が原形質膜で発生したことを明らかにしました。これは、ATACBP6がサイトゾルで以前に特定されたため、予想外でした。ATACBP6の発現は、一般に、QRT-PCRおよびマイクロアレイの結果と一致するATACBP6またはPDLP8プロモーター駆動型Gusで形質転換されたトランスジェニックシロイヌナズナのβ-グルクロニダーゼ（GUS）アッセイのPDLP8よりも高かった。さらに、抗ATACBP6抗体を使用したウエスタンブロット分析では、PDLP8 T-DNA挿入変異体におけるATACBP6発現の減少が示され、PDLP8は、おそらくPDLP8がPDLP8が明るい場所で、おそらくプラズモードマタにおいて、SIVE要素のATACBP6蓄積に影響を与える可能性があることを示唆しています。ATACBP6は免疫検出されています。

In Arabidopsis thaliana, six acyl-CoA-binding proteins (ACBPs), designated as AtACBP1 to AtACBP6, have been identified to function in various events related to plant stress and development. The 10-kDa AtACBP6 is the smallest in this protein family, and recombinant AtACBP6 interacts with lipids in vitro by binding to acyl-CoA esters and phosphatidylcholine. Using anti-AtACBP6 antibodies in immunoelectron microscopy, we have localized AtACBP6 in the Arabidopsis phloem. The detection of immunogold grains in the plasmodesmata suggested that AtACBP6 could move from the companion cells to the sieve elements via the plasmodesmata. As AtACBP6 has been identified in a membrane-based interactome analysis to be a potential protein partner of Plasmodesmata-Localized Protein, PDLP8, AtACBP6-PDLP8 interaction was investigated herein utilizing isothermal titration calorimetry, as well as pull-down and bimolecular fluorescence complementation assays (BiFC). Notably, BiFC data revealed that AtACBP6-PDLP8 interaction occurred at the plasma membrane, which was unexpected as AtACBP6 has been previously identified in the cytosol. AtACBP6 expression was generally higher than PDLP8 in β-glucuronidase (GUS) assays on transgenic Arabidopsis transformed with AtACBP6 or PDLP8 promoter-driven GUS, consistent with qRT-PCR and microarray results. Furthermore, western blot analysis using anti-AtACBP6 antibodies showed a reduction in AtACBP6 expression in the pdlp8 T-DNA insertional mutant, suggesting that PDLP8 may possibly influence AtACBP6 accumulation in the sieve elements, probably in the plasmodesmata, where PDLP8 is confined and to where AtACBP6 has been immunodetected.