シクロフィリンAは、プロテオミクス分析により、ヒト経口粘液性線維症の候補マーカーとして明らかにされました

口腔粘膜下線維症（OSF）は、口腔がんの素因となる慢性潜入疾患です。OSFの分子マーカーを理解することは、口腔がんの診断と治療に不可欠です。この研究では、OSF組織のタンパク質発現プロファイルを、2次元の電気泳動（2-DE）によって正常粘膜組織と比較しました。2-DE画像は、質量分析（MS）を使用したカット、スポット検出、および一致分析を通じて分析されました。差次的に発現した遺伝子は、候補として特定されました。RT-PCR、ウエスタンブロット、および免疫組織化学を実施して、OSFと正常な粘液組織間の候補の発現の違いを検証しました。次に、候補を標的とするshRNAを、Lipofectamine2000によって3T3細胞にトランスフェクトして、遺伝子機能を研究しました。細胞増殖とアポトーシスは、MTT、クローン原性形成、PIおよびTUNEL染色によって測定されました。プロテオーム解析から、微分発現を伴う182の選択されたスポットのうち94がMS分析によって特定され、シクロフィリンA（CYPA）はOSF関連タンパク質候補であると判断されました。OSFと正常組織間の発現の有意な違いが検証され、RT-PCR、ウエスタンブロット、免疫組織化学分析によって確認されました。RNA干渉によるCYPA発現の阻害は、細胞増殖とアポトーシスプロセスに関与する潜在的な活性を示唆しました。結論として、これらの結果は、OSFの病因の新しい分子メカニズムを示し、CYPAがOSFの潜在的なバイオマーカーおよび遺伝子介入標的として実証されました。これらのデータは、口腔がんの治療薬の開発に役立つ可能性があります。

Oral submucous fibrosis (OSF) is a chronic insidious disease which predisposes to oral cancer. Understanding the molecular markers for OSF is critical for diagnosis and treatment of oral cancer. In this study, the proteins expression profile of OSF tissues was compared to normal mucous tissues by 2 dimensional electrophoresis (2-DE). The 2-DE images were analyzed through cut, spot detection and match analysis using mass spectrometry (MS). Differentially expressed genes were identified as candidates. RT-PCR, Western Blot and immunohistochemistry were performed to validate the difference in expression of the candidates between OSF and normal mucous tissues. The shRNA targeted to the candidates were then transfected by Lipofectamine2000 to the 3T3 cells to study gene function. Cell proliferation and apoptosis were measured by MTT, clonogenic formation, PI and TUNEL staining. From the proteomic analysis, 94 of the 182 selected spots with differential expression were identified by MS analysis and Cyclophilin A (CYPA) was determined to be the OSF-associated protein candidate. The significant differences in expression between OSF and normal tissues were verified and confirmed by RT-PCR, Western blot and Immunohistochemical analysis. Inhibition of CYPA expression by RNA interference suggested its potential activities involved in cell proliferation and apoptosis process. In conclusion, these results indicated a novel molecular mechanism of OSF pathogenesis and demonstrated CYPA as a potential biomarker and gene intervention targets of OSF. These data may help the development for therapeutics of oral cancer.