ヒト好中球エラスターゼは、プラスミノーゲンの競合分解とアンジオスタチンの生成を通じてフィブリノリシスのシャットダウンを媒介します

背景：外傷患者のサブセットは、病理学的な高血球分解ではなく、線維分解閉鎖を受け、臓器不全に寄与します。外傷における線維溶解シャットダウンの分子基盤は不完全に理解されています。プライミング/活性化ヒト好中球（HNE）から放出されたエラスターゼは、歴史的にフィブリン（OGEN）オリティックと言われています。しかし、HNEはプラスミノーゲン（PLG）をアンジオスタチン（ANG）に分解し、クリングルドメインを保持するが、タンパク質分解機能を保持することもでき、それにより、組織プラスミノーゲン活性化因子（TPA）によって活性プラスミンの生成を競うことができます。私たちは、HNEが線維分解ではなく線維分解シャットダウンを駆動できると仮定しました。 方法：精製フィブリノーゲン + PLGシステムでの光散乱（λ= 620 nm）、およびCa/トロンビン±TPA、±HNE、および±ANGを閉じた健康なクエン酸血漿でタービドメトリを実行し、フィブリノリシスに対するHNE効果を評価し、時間によって定量化したフィブリノリシスに対するHNE効果を評価します。ミッドポイント（TM）を遷移します。対照からのΔTMは、コントロール±95％CIの割合として報告されています。PLGまたはTPAと結合した精製HNEをウエスタンブロットで分析して、切断産物を特定しました。外因性HNEは、健康なボランティアの血液と混合されたin vivo（n = 7）を混合し、Teg±TPAで使用して線維分解への影響を評価しました。 結果：HNEは、TPAの非存在下でタービドメトリーまたはTEGによって評価されるように、フィブリン塊、凝固した血漿、または全血に測定可能な線維溶解を引き起こしませんでした。TPA処理時に、線維溶解を評価する3つの方法すべてが、コントロールと比較してHNEによって引き起こされるフィブリノリシスの遅延と減少を示しました：フィブリン凝固乱射測定ΔTM= 110.7％（CI 105.0-116.5％）、クロットされたクエン酸塩プラズマ（n = 6健康なボランティア）ΔTM=126.1％（CI 110.4-141.8％）、およびΔLy30= 28％（P = 0.043）の全血天イ（n = 7人の健康的なボランティア）。HNE-PLG共インキュベーションのウエスタンブロット分析により、HNEがアンジオスタチンK1-3を生成し、アンジオスタチンK1-3で処理した血漿濁度アッセイが発生したことが確認されました。 結論：HNEはPLGを分解し、アンジオスタチンK1-3を生成します。これは、フィブリン（OGEN）のHNE切断よりも優勢です。これらの発見は、エラスターゼの好中球放出が外傷誘発性線維溶解閉鎖の根底にある可能性があることを示唆しています。

BACKGROUND: A subset of trauma patients undergo fibrinolysis shutdown rather than pathologic hyperfibrinolysis, contributing to organ failure. The molecular basis for fibrinolysis shutdown in trauma is incompletely understood. Elastase released from primed/activated human neutrophils (HNE) has historically been described as fibrin(ogen)olytic. However, HNE can also degrade plasminogen (PLG) to angiostatin (ANG), retaining the kringle domains but not the proteolytic function, and could thereby compete for generation of active plasmin by tissue plasminogen activator (tPA). We hypothesized that HNE can drive fibrinolysis shutdown rather than fibrinolysis. METHODS: Turbidometry was performed using light scatter (λ = 620 nm) in a purified fibrinogen + PLG system and in healthy citrate plasma clotted with Ca/thrombin ± tPA, ±HNE, and ±ANG to evaluate HNE effects on fibrinolysis, quantified by time to transition midpoint (Tm). ΔTm from control is reported as percent of control ±95% CI. Purified HNE coincubated with PLG or tPA was analyzed by western blot to identify cleavage products. Exogenous HNE was mixed ex vivo with healthy volunteer blood (n = 7) and used in TEG ± tPA to evaluate effects on fibrinolysis. RESULTS: HNE did not cause measurable fibrinolysis on fibrin clots, clotted plasma, or whole blood as assessed by turbidometry or TEG in the absence of tPA. Upon tPA treatment, all three methods of evaluating fibrinolysis showed delays and decreases in fibrinolysis caused by HNE relative to control: fibrin clot turbidometry ΔTm = 110.7% (CI 105.0-116.5%), clotted citrate plasma (n = 6 healthy volunteers) ΔTm = 126.1% (CI 110.4-141.8%), and whole blood native TEG (n = 7 healthy volunteers) with ΔLY30 = 28% (p = 0.043). Western blot analysis of HNE-PLG co-incubation confirmed that HNE generates angiostatin K1-3, and plasma turbidity assays treated with angiostatin K1-3 delayed fibrinolysis. CONCLUSION: HNE degrades PLG and generates angiostatin K1-3, which predominates over HNE cleavage of fibrin(ogen). These findings suggest that neutrophil release of elastase may underlie trauma-induced fibrinolytic shutdown.