PDE8は、PDE8A-RAF-1キナーゼシグナル伝達複合体を介してCD4+ T細胞の運動性を制御します

cAMPのレベルは、炎症性障害の治療の標的であるホスホジエステラーゼ酵素（PDES）によって規制されています。以前に、PDE8がT細胞の運動性を調節することを示しました。ここで、初めて、PDE8Aは、V-RAF-1マウス白血病ウイルス性癌遺伝子ホモログ1（RAF-1）キナーゼシグナル伝達経路を介してT細胞機能の制御の一部を発揮することを報告します。生理学的条件下でのT細胞の運動性を調べるために、フローアッセイで内皮細胞およびリガンドとのT細胞相互作用を分析しました。高度にPDE8選択的酵素阻害剤PF-04957325は、in vivoミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG）活性化炎症性CD4+ Tエフェクター（TEFF）細胞の脳内皮細胞への炎症性CD4+ Tエフェクター（TEFF）の接着を抑制します。最近、PDE8AはRAF-1に関連することが示され、RAF-1の周りに低いcAMPレベルのコンパートメントを作成し、それによりプロテインキナーゼA（PKA）媒介阻害阻害リン酸化から保護しました。Teff細胞のこの複合体の機能をテストするために、PDE8a-Raf-1相互作用を選択的に破壊する細胞透過性ペプチドを使用しました。破壊者ペプチドは、酵素阻害剤よりも強力にテフ内皮細胞の相互作用を阻害します。さらに、LFA-1/ICAM-1の相互作用は、流れ下でのTEFF細胞の接着、拡散、および移動の破壊因子ペプチド媒介の標的の標的として特定されました。機械的には、PDE8A-RAF-1複合体の破壊がTEFF細胞のRAF-1シグナル伝達を大きく変化させることが観察されました。まとめて、我々の研究は、酵素阻害剤またはPDE8A-RAF-1キナーゼ複合体混乱によるPDE8A阻害が、流れの下でのTeff細胞の接着と移動を減少させ、炎症におけるT細胞を標的T細胞への新しいアプローチを表すことを示しています。

The levels of cAMP are regulated by phosphodiesterase enzymes (PDEs), which are targets for the treatment of inflammatory disorders. We have previously shown that PDE8 regulates T cell motility. Here, for the first time, we report that PDE8A exerts part of its control of T cell function through the V-raf-1 murine leukemia viral oncogene homolog 1 (Raf-1) kinase signaling pathway. To examine T cell motility under physiologic conditions, we analyzed T cell interactions with endothelial cells and ligands in flow assays. The highly PDE8-selective enzymatic inhibitor PF-04957325 suppresses adhesion of in vivo myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) activated inflammatory CD4+ T effector (Teff) cells to brain endothelial cells under shear stress. Recently, PDE8A was shown to associate with Raf-1 creating a compartment of low cAMP levels around Raf-1 thereby protecting it from protein kinase A (PKA) mediated inhibitory phosphorylation. To test the function of this complex in Teff cells, we used a cell permeable peptide that selectively disrupts the PDE8A-Raf-1 interaction. The disruptor peptide inhibits the Teff-endothelial cell interaction more potently than the enzymatic inhibitor. Furthermore, the LFA-1/ICAM-1 interaction was identified as a target of disruptor peptide mediated reduction of adhesion, spreading and locomotion of Teff cells under flow. Mechanistically, we observed that disruption of the PDE8A-Raf-1 complex profoundly alters Raf-1 signaling in Teff cells. Collectively, our studies demonstrate that PDE8A inhibition by enzymatic inhibitors or PDE8A-Raf-1 kinase complex disruptors decreases Teff cell adhesion and migration under flow, and represents a novel approach to target T cells in inflammation.