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マスト細胞によって生成された化学メディエーターであるロイコトリエン（LT）は、食物アレルギーや干し草などのアレルギー症状に重要な役割を果たします。マスト細胞株PB-3Cを使用して、化学物質の抗LTB4活性の評価方法を構築しようとしました。アラキドン酸（AA）の有無にかかわらずプレ培養されたPB-3Cは、カルシウムイオノフォア（A23187）によって20分間刺激され、細胞によるLTB4産生はUV検出によるHPLCによって決定されました。LTB4は、PB-3CがAAなしで事前に培養されたときに検出されませんでした。一方、AAで事前培養されたPB-3CによるLTB4産生はHPLCによって検出可能であり、LTB4検出のPB-3Cの最適条件は、50 µM AAで48時間前培養された細胞を利用することでした。MK-886（5-リポキシゲナーゼ阻害剤）はLTB4産生を完全に阻害しましたが、AACOCF3（ホスホリパーゼA2阻害剤）はLTB4産生がわずかに増加し、LTB4が5リポキシゲナーゼ経路を介して外因性自由AAから生成されたことを示唆しています。この手法を、食品成分の抗LTB4活性の評価に適用しました。50 µM AAで48時間前培養したPB-3Cは、50 µMの大豆イソフラボン（Daidzin、Genistin、Daidzein、およびGenistein）、Equol、Quercetin、またはKaempferolの存在下でA23187で刺激されました。Genistein、Equol、Quercetin、およびKaempferolは、細胞毒性なしでLTB4産生を強く阻害しました。これらの結果は、PB-3Cを使用した新しいアッセイシステムが、食物成分によるLTB4阻害活性を評価するのに便利であることを示唆しています。この方法は、フラボノイドや構造活性関係などの食品成分によるLTB4放出抑制のメカニズムの解明に利用できます。
マスト細胞によって生成された化学メディエーターであるロイコトリエン（LT）は、食物アレルギーや干し草などのアレルギー症状に重要な役割を果たします。マスト細胞株PB-3Cを使用して、化学物質の抗LTB4活性の評価方法を構築しようとしました。アラキドン酸（AA）の有無にかかわらずプレ培養されたPB-3Cは、カルシウムイオノフォア（A23187）によって20分間刺激され、細胞によるLTB4産生はUV検出によるHPLCによって決定されました。LTB4は、PB-3CがAAなしで事前に培養されたときに検出されませんでした。一方、AAで事前培養されたPB-3CによるLTB4産生はHPLCによって検出可能であり、LTB4検出のPB-3Cの最適条件は、50 µM AAで48時間前培養された細胞を利用することでした。MK-886（5-リポキシゲナーゼ阻害剤）はLTB4産生を完全に阻害しましたが、AACOCF3（ホスホリパーゼA2阻害剤）はLTB4産生がわずかに増加し、LTB4が5リポキシゲナーゼ経路を介して外因性自由AAから生成されたことを示唆しています。この手法を、食品成分の抗LTB4活性の評価に適用しました。50 µM AAで48時間前培養したPB-3Cは、50 µMの大豆イソフラボン（Daidzin、Genistin、Daidzein、およびGenistein）、Equol、Quercetin、またはKaempferolの存在下でA23187で刺激されました。Genistein、Equol、Quercetin、およびKaempferolは、細胞毒性なしでLTB4産生を強く阻害しました。これらの結果は、PB-3Cを使用した新しいアッセイシステムが、食物成分によるLTB4阻害活性を評価するのに便利であることを示唆しています。この方法は、フラボノイドや構造活性関係などの食品成分によるLTB4放出抑制のメカニズムの解明に利用できます。
Leukotrienes (LTs), chemical mediators produced by mast cells, play an important role in allergic symptoms such as food allergies and hay fever. We tried to construct an evaluation method for the anti-LTB4 activity of chemical substances using a mast cell line, PB-3c. PB-3c pre-cultured with or without arachidonic acid (AA) was stimulated by calcium ionophore (A23187) for 20 min, and LTB4 production by the cells was determined by HPLC with UV detection. LTB4 was not detected when PB-3c was pre-cultured without AA. On the other hand, LTB4 production by PB-3c pre-cultured with AA was detectable by HPLC, and the optimal conditions of PB-3c for LTB4 detection were to utilize the cells pre-cultured with 50 µM AA for 48 h. MK-886 (5-lipoxygenase inhibitor) completely inhibited LTB4 production, but AACOCF3 (phospholipase A2 inhibitor) slightly increased LTB4 production, suggesting that LTB4 was generated from exogenous free AA through 5-lipoxygenase pathway. We applied this technique to the evaluation of the anti-LTB4 activity of food components. PB-3c pre-cultured with 50 µM AA for 48 h was stimulated with A23187 in the presence of 50 µM soybean isoflavones (daidzin, genistin, daidzein, and genistein), equol, quercetin, or kaempferol. Genistein, equol, quercetin, and kaempferol strongly inhibited LTB4 production without cytotoxicity. These results suggest that a new assay system using PB-3c is convenient to evaluate LTB4 inhibition activity by food components. This method could be utilized for elucidation of the mechanisms of LTB4 release suppression by food components such as flavonoids and the structure-activity relationship.
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