新規CDRグラフト設計による肝細胞癌を標的とする高親和性ヒト化抗CD24抗体のエンジニアリング

分化のクラスター24（CD24）は、肝細胞癌（HCC）の腫瘍形成と進行に関与する特定の表面マーカーです。しかし、報告されているすべての抗CD24抗体は、必然的な免疫原性のマウスのものです。これに対処するために、分子構造とドッキングベースの相補性決定領域（CDR）グラフトの両方を使用した方法が、人間化に使用されました。異種性CDRがヒト抗体に移植した後、ループの立体構造と抗原結合界面に関与する残基をサポートする3種類の標準残基（ループ基礎、およびループ残基との相互作用）が背面に戻っていました。変異。4つの操作された抗体が産生され、その中でHg7-BM3には、親キメラ抗体CG7と実質的に同一の3D構造と親和性パラメーターがあります。in vitroでは、Hg7-BM3はCG7に対する優れた免疫原性と血清安定性を示しました。抗体依存性細胞細胞毒性（ADCC）、腫瘍細胞の内在化、およびin vivo標的アッセイは、Hg7-BM3が抗体薬物共役（ADC）として発達の可能性があることを示しています。したがって、Hg7-BM3-VCMMAEコンジュゲートを生成しました。これは、腫瘍細胞アポトーシスを誘導し、HCC異種移植片を持つヌードマウスを効果的に抑制することが示されました。結論として、我々の研究は、抗体の人間化のための新しいインスピレーションと、実験室研究および臨床応用のADC候補を提供します。

Cluster of differentiation 24 (CD24) is a specific surface marker involved in the tumorigenesis and progression of hepatocellular carcinoma (HCC). However, all reported anti-CD24 antibodies are murine ones with inevitable immunogenicity. To address this, a method using both molecular structure and docking-based complementarity determining region (CDR) grafting was employed for humanization. After xenogeneic CDR grafting into a human antibody, three types of canonical residues (in the VL/VH interface core, in the loop foundation, and interaction with loop residues) that support loop conformation and residues involved in the antigen-binding interface were back-mutated. Four engineered antibodies were produced, among which hG7-BM3 has virtually identical 3-D structure and affinity parameters with the parental chimeric antibody cG7. In vitro, hG7-BM3 demonstrated superior immunogenicity and serum stability to cG7. Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), tumor cell internalization and in vivo targeting assays indicate that hG7-BM3 has the potential for development as an antibody-drug conjugate (ADC). We therefore generated the hG7-BM3-VcMMAE conjugate, which was shown to induce tumor cell apoptosis and effectively suppress nude mice bearing HCC xenografts. In conclusion, our study provides new inspiration for antibody humanization and an ADC candidate for laboratory study and clinical applications.