293TT哺乳類細胞とニコチアナ・ベンサミアナにおける合成疾患および羽病ウイルスゲノムクローンの異種ローリングセルリング循環複製

感染性のくちばしおよび羽病の調製は、これまで、ウイルスに感染していることが知られている故人または安楽死のオウムの全組織からのウイルスの抽出に依存していた。ウイルスは、あらゆる源から組織培養細胞を使用してin vitroでまだ成長していないため、病気の組織からの抽出が必要です。感染性DNAクローンは、ブタおよびアヒルのカモウリスのために合成されており、両方とも宿主細胞で複製され、動物の活性ウイルス感染をもたらしますが、これはBFDVには示されていません。この研究の目的は、ワクチン検査のために鳥のチャレンジ材料として使用できる感染性BFDVゲノムクローンを準備することでした。推定的に感染性のBFDVゲノムクローンは、哺乳類の細胞培養で、および植物特異的SSDNAジェミニウイルス複製成分の存在下で植物ニコティアナベンサミアナで設計およびテストされました。ローリングサークル増幅、QPCR、複製欠損クローン、救助プラスミドを使用して、複製を評価しました。293TT哺乳類細胞にトランスフェクトした場合、合成部分的に二量体のBFDVゲノムクローンが自己表現され、ジェミニビロス複製要素の存在下でN. benthamianaでも複製されることを示しました。これは、あらゆる細胞系で複製されるBFDVゲノムの最初の報告であり、植物のジェミニウイルスの助けを借りて複製するサーコビラスの最初の報告です。これらの開発は、BFDVの試薬とワクチンを作成し、ワクチンの有効性をテストし、合理的に設計された人工ゲノムを使用したウイルス複製の調査の可能性を開く可能性があります。

The preparation of infectious beak and feather disease circovirus virions (BFDV) has until now relied on the extraction of virus from whole tissue of deceased or euthanized parrots known to be infected with the virus. Extraction from diseased tissue is necessary, as the virus has yet to be grown in vitro using tissue-cultured cells from any source. While infectious DNA clones have been synthesized for porcine and duck circoviruses, and both replicate in host cells and result in active viral infection in animals, this has not been shown for BFDV. The aim of this study was to prepare an infectious BFDV genomic clone that could be used as challenge material in birds for vaccine testing. A putatively infectious BFDV genomic clone was designed and tested in mammalian cell culture, and in the plant Nicotiana benthamiana in the presence of plant-specific ssDNA geminivirus replication components. Replication was assessed using rolling-circle amplification, qPCR, replication-deficient clones and rescue plasmids. We showed that a synthetic partially dimeric BFDV genomic clone self-replicated when transfected into 293TT mammalian cells, and was also replicated in N. benthamiana in the presence of geminivirus replication elements. This is the first report of a BFDV genome replicating in any cell system, and the first report of a circovirus replicating with the aid of a geminivirus in a plant. Both of these developments could open up possibilities for making reagents and vaccines for BFDV, testing vaccine efficacy and investigating viral replication using rationally designed artificial genomes.