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8-ヒドロキシデオキシグアノシン（8-OHDG）は、酸化DNA損傷の広く使用されているバイオマーカーです。末梢血の白血球中の8-OHDGは、突然変異と癌のリスクに関連しています。末梢血性白血球の8-OHDGのレベルは、尿ではなく酸化ストレスに対する長期的な反応を示すことができます。白血球8-OHDGの正確な識別と定量化は、形成、修復、および生物学的結果のメカニズムを理解するために不可欠です。この研究では、ヒト末梢白血球の8-OHDGを検出するために、高速かつ正確な超パフォーマンス液体クロマトグラフィータンデム質量分析（UHPLC-MS/MS）メソッドを開発および検証しました。血液サンプル中のDNAを抽出して消化し、Zorbax Eclipse Plus C18カラム（2.1×100mm、1.8μm）でIsocratic溶出を使用してUHPLC-MS/MSに服従しました。[15N5] -8-OHDGを内部標準として使用して、複数の反応モニタリング（MRM）モードを採用しました。アッセイは、R2 = 0.999で1.0-100NMの濃度範囲で線形でした。スパイクされたサンプルの精度は90.9％-94.8％で、日中の精度は3.7％以内でした。検出限界（LOD）は0.30nmで、定量化制限（LOQ）は5μlのサンプル注入で1.0nmです。開発されたUHPLC-MS/MSメソッドを使用したヒト白血球8-OHDG（n = 121）の分析により、がん患者群（n = 46）の白血球8-OHDGのレベルが健康管理（n = 75）よりも著しく高いことを示しています。
8-ヒドロキシデオキシグアノシン（8-OHDG）は、酸化DNA損傷の広く使用されているバイオマーカーです。末梢血の白血球中の8-OHDGは、突然変異と癌のリスクに関連しています。末梢血性白血球の8-OHDGのレベルは、尿ではなく酸化ストレスに対する長期的な反応を示すことができます。白血球8-OHDGの正確な識別と定量化は、形成、修復、および生物学的結果のメカニズムを理解するために不可欠です。この研究では、ヒト末梢白血球の8-OHDGを検出するために、高速かつ正確な超パフォーマンス液体クロマトグラフィータンデム質量分析（UHPLC-MS/MS）メソッドを開発および検証しました。血液サンプル中のDNAを抽出して消化し、Zorbax Eclipse Plus C18カラム（2.1×100mm、1.8μm）でIsocratic溶出を使用してUHPLC-MS/MSに服従しました。[15N5] -8-OHDGを内部標準として使用して、複数の反応モニタリング（MRM）モードを採用しました。アッセイは、R2 = 0.999で1.0-100NMの濃度範囲で線形でした。スパイクされたサンプルの精度は90.9％-94.8％で、日中の精度は3.7％以内でした。検出限界（LOD）は0.30nmで、定量化制限（LOQ）は5μlのサンプル注入で1.0nmです。開発されたUHPLC-MS/MSメソッドを使用したヒト白血球8-OHDG（n = 121）の分析により、がん患者群（n = 46）の白血球8-OHDGのレベルが健康管理（n = 75）よりも著しく高いことを示しています。
8-Hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) is a widely-used biomarker of oxidative DNA damages. 8-OHdG in peripheral blood leukocyte is associated with mutation and cancer risk. The level of 8-OHdG in peripheral blood leukocytes can indicate a long-term response to oxidative stress rather than that in urine. Accurate identification and quantification of leukocyte 8-OHdG are essential for understanding its mechanism of formation, repair, and biological consequences. In this study, a fast and accurate ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) method was developed and validated to detect 8-OHdG in human peripheral leukocyte. DNA in blood samples were extracted and digested, then subjected onto UHPLC-MS/MS using an isocratic elution on a Zorbax Eclipse Plus C18 column (2.1×100mm, 1.8μm). Multiple reaction monitoring (MRM) mode was adopted by using [15N5]-8-OHdG as an internal standard. The assay was linear over the concentration range of 1.0-100nM with R2=0.999. The accuracy for spiked samples was 90.9%-94.8%, and the intra-day precision was within 3.7%. The limit of detection (LOD) is 0.30nM and limit of quantification (LOQ) is 1.0nM with 5μl of sample injection. By the analysis of human leukocyte 8-OHdG (n=121) using the developed UHPLC-MS/MS method, it demonstrates that the level of leukocyte 8-OHdG of the cancer patients group (n=46) is significantly higher than that of the health control (n=75).
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