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Anastatus japonicusは、Litchi Pest Tessaratoma papillosaの寄生虫のスズメバチと天敵であり、中国で何十年もの間、A。japonicusはT. papillosaをコントロールするためにAntheraea pernyiの卵の中で大量に育てられてきました。A. japonicusの産卵挙動の根底にある嗅覚メカニズムを調査するために、一連の実験が行われました。最初に、A。japonicusのアンテナでトランスクリプトーム分析を実施し、結果として得られるアセンブリは70,473個のユニゲンの生成につながりました。その後、21,368個のユニゲンは、既知のタンパク質、48個の臭気受容体(ORS)(ORCOを含む)および13個の触角イオントロピック受容体(IRS)(共受容体IR8AおよびIR25Aを含む)に一致し、完全なオープンリーディングフレーム(ORFS)を形成すると予測されました。FPKM(100万kbあたりの断片)値とRT-PCRの結果は、ajaporco、ajapor10、ajapor27、ajapor33、ajapor35が嗅覚器官で非常に豊富または特異的に発現していることを示しました。さらに、アジャポルコのサイレンシングは、寄生率とA. japonicusの宿主を求める時間の両方に大幅な減少をもたらしましたが、DSRNA注射はIR8AとIR25Aが有意な行動変化をもたらさなかったことを示し、A。japonicusの産卵挙動はIRベースの経路よりも依存していることを示唆しています。以前のGC-MSデータは、これらの宿主植物や宿主昆虫から豊富な29の化合物を導き出しました。A. japonicusで電気生理学的および産卵アッセイを実施し、8人の臭気剤が有意な電気アンノグラム(EAG)応答を誘発することがわかった。これらの臭気剤の中で、β-カリオフィレン、アンダーセーン、(E)-α-ファルネン(+) - アロマデンドレンおよびCIS-3-ヘキセン-OLは産卵に強い誘導剤効果をもたらしましたが、2-エチル-1-ヘキサン-OL、酢酸エチルおよびα-菌類の効果は強い効果がありました。したがって、これらの化学物質は、A。japonicusの産卵ガイダンス/反発挙動に影響を与える可能性があります。官能性臭気剤に調整された標的ORをさらに調査するために、上記の9つの候補ORはRNA干渉によって沈黙し、結果は、アジャポルコサイレンシンググループのすべてのテストされた機能性臭気剤のEAG応答の大幅な減少を示した。さらに、Ajapor35サイレンシング基は、β-カリオフィレンおよび(E)-α-ファルネセに対するEAG応答の有意な減少を示し、Ajapor35がこれら2つの産卵誘引剤β-カリオフィレンと(E)-α-ファルネセンに調整されていることを示しています。さらなるバイナリ選択産卵アッセイは、β-カリオフィレンの産卵誘引効果と(E)-α-ファルネセンがAjapor35を沈黙させた後に消失することを示し、宿主植物からのこれらの誘引剤の放出がA. japonicusを導くことができることを示しています。この研究は、A。japonicusの産卵挙動の根底にある分子基礎と機能的化学物質のより良い理解を提供し、結果は生物核アプローチの改善に役立つ可能性があります。
Anastatus japonicusは、Litchi Pest Tessaratoma papillosaの寄生虫のスズメバチと天敵であり、中国で何十年もの間、A。japonicusはT. papillosaをコントロールするためにAntheraea pernyiの卵の中で大量に育てられてきました。A. japonicusの産卵挙動の根底にある嗅覚メカニズムを調査するために、一連の実験が行われました。最初に、A。japonicusのアンテナでトランスクリプトーム分析を実施し、結果として得られるアセンブリは70,473個のユニゲンの生成につながりました。その後、21,368個のユニゲンは、既知のタンパク質、48個の臭気受容体(ORS)(ORCOを含む)および13個の触角イオントロピック受容体(IRS)(共受容体IR8AおよびIR25Aを含む)に一致し、完全なオープンリーディングフレーム(ORFS)を形成すると予測されました。FPKM(100万kbあたりの断片)値とRT-PCRの結果は、ajaporco、ajapor10、ajapor27、ajapor33、ajapor35が嗅覚器官で非常に豊富または特異的に発現していることを示しました。さらに、アジャポルコのサイレンシングは、寄生率とA. japonicusの宿主を求める時間の両方に大幅な減少をもたらしましたが、DSRNA注射はIR8AとIR25Aが有意な行動変化をもたらさなかったことを示し、A。japonicusの産卵挙動はIRベースの経路よりも依存していることを示唆しています。以前のGC-MSデータは、これらの宿主植物や宿主昆虫から豊富な29の化合物を導き出しました。A. japonicusで電気生理学的および産卵アッセイを実施し、8人の臭気剤が有意な電気アンノグラム(EAG)応答を誘発することがわかった。これらの臭気剤の中で、β-カリオフィレン、アンダーセーン、(E)-α-ファルネン(+) - アロマデンドレンおよびCIS-3-ヘキセン-OLは産卵に強い誘導剤効果をもたらしましたが、2-エチル-1-ヘキサン-OL、酢酸エチルおよびα-菌類の効果は強い効果がありました。したがって、これらの化学物質は、A。japonicusの産卵ガイダンス/反発挙動に影響を与える可能性があります。官能性臭気剤に調整された標的ORをさらに調査するために、上記の9つの候補ORはRNA干渉によって沈黙し、結果は、アジャポルコサイレンシンググループのすべてのテストされた機能性臭気剤のEAG応答の大幅な減少を示した。さらに、Ajapor35サイレンシング基は、β-カリオフィレンおよび(E)-α-ファルネセに対するEAG応答の有意な減少を示し、Ajapor35がこれら2つの産卵誘引剤β-カリオフィレンと(E)-α-ファルネセンに調整されていることを示しています。さらなるバイナリ選択産卵アッセイは、β-カリオフィレンの産卵誘引効果と(E)-α-ファルネセンがAjapor35を沈黙させた後に消失することを示し、宿主植物からのこれらの誘引剤の放出がA. japonicusを導くことができることを示しています。この研究は、A。japonicusの産卵挙動の根底にある分子基礎と機能的化学物質のより良い理解を提供し、結果は生物核アプローチの改善に役立つ可能性があります。
Anastatus japonicus is a parasitic wasp and natural enemy of the litchi pest Tessaratoma papillosa, and for decades in China, A. japonicus has been mass-reared inside the eggs of Antheraea pernyi to control T. papillosa. A series of experiments was performed to explore the olfactory mechanism underlying the oviposition behavior of A. japonicus. First, a transcriptomic analysis was performed on the antennae of A. japonicus, and the resulting assemblies led to the generation of 70,473 unigenes. Subsequently, 21,368 unigenes were matched to known proteins, 48 odorant receptors (ORs) (including Orco) and 13 antennal ionotropic receptors (IRs) (including the co-receptors IR8a and IR25a) were identified and predicted to form complete open reading frames (ORFs). The FPKM (fragments per Kb per million reads) values and RT-PCR results showed that AjapOrco, AjapOR10, AjapOR27, AjapOR33 and AjapOR35 were either highly abundant or expressed specifically in the olfactory organs. Furthermore, AjapOrco silencing resulted in a significant decrease in both the parasitism rate and the host-seeking time of A. japonicus, whereas dsRNA injection showed that IR8a and IR25a did not produce significant behavioral changes, suggesting that the oviposition behavior of A. japonicus is more reliant on OR-based pathways than IR-based pathways. Our previous GC-MS data derived twenty-nine compounds which were abundent from these host plants and host insects. We performed electrophysiological and oviposition assays on A. japonicus, and eight odorants were found to elicit a significant electroantennogram (EAG) response. Among these odorants, β-Caryophyllene, Undecane, (E)-α-Farnesene (+)-Aromadendrene and Cis-3-Hexen-ol had strong attractant effects on oviposition, whereas 2-Ethyl-1-Hexan-ol, Ethyl Acetate and α-Caryophyllene had a strong repellant effects. Thus, these chemicals might influence oviposition guidance/repulsion behavior in A. japonicus. To further explore the target ORs that are tuned to the functional odorants, the nine candidate ORs described above were silenced by RNA interference, and the results showed that a large decrease in the EAG response of all the tested functional odorants in the AjapOrco-silencing group. In addition, the AjapOR35-silencing group showed a significant decrease in the EAG response to β-Caryophyllene and (E)-α-Farnesene, indicating that AjapOR35 is tuned to these two oviposition attractants β-Caryophyllene and (E)-α-Farnesene. Further binary-choice oviposition assays showed that the oviposition attractant effect of β-Caryophyllene and (E)-α-Farnesene vanished after AjapOR35 was silenced, indicating that the emission of these attractants from host plants can guide A. japonicus to locate eggs for ovipositioning and indicated that AjapOR35 is correlated with the olfactory detection oviposition behavior of this species. This study provides a better understanding of the molecular basis and functional chemicals underlying the oviposition behavior of A. japonicus, and the results may help improve biocontrol approaches.
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