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ジャックビーンズ（Canavalia endiformis）の市販のウレアーゼのナノ粒子（NP）凝集体は、脱溶媒和とグルタルアルデヒドの架橋により調製され、ジステアミンジヒドロ塩化によって官能化されました。これらの酵素ナノ粒子（ENP）は、透過型電子顕微鏡（TEM）、UVおよびフーリエ変換赤外線（FTIR）分光法によって特徴付けられました。ウレアーゼNPのTEM画像は、平均51.2nmの18〜100nmの範囲でサイズを示しました。ENPは、ネイティブの酵素分子よりも貯蔵寿命が長く、より活性で安定していました。ENPは、1.63mg/cm2の結合収率を持つ遊離尿素の初期活性の32.22％の保持を伴うグルタルアルデヒド結合を介して、グルタルアルデヒド結合を介してキトサン（CH）活性化ニトロセルロース（NC）膜に固定されました。このNC膜は、Oリングを備えたアンモニウムイオン選択電極（AISE）の下/敏感な端にマウントされ、次に電極をデジタルpHメーターに接続して、ポテンショメコリー測定尿素バイオセンサーを構築しました。バイオセンサーは、pH 5.5および40°Cで10秒以内に最適な応答を示しました。バイオセンサーは、明らかに健康な血清および腎臓障害に苦しむ人の血清における尿素のポテンショメコリー測定を測定するために採用されました。バイオセンサーには、2〜80µm/L（0.002-0.08mm）の幅広い作業範囲と23mV/10年の感度を持つ1µm/Lの低い検出限界が表示されました。血清中の尿素を追加した分析的回復は106.33％でした。現在のバイオセンサーのバリエーションの内およびバッチ係数（CV）は、それぞれ0.18％と0.32％でした。参照法（酵素比色キット法）によって得られた血清尿素値と現在のバイオセンサーとの間には、良好な相関（r = 0.99）がありました。バイオセンサーは、Na+、K+、NH+4、およびCa2+、Mg2+、Cu2+、およびAscorbin酸からの干渉がわずかでしたが、特定のイオン選択電極によって克服されたわずかな干渉がありました。ENPに結合したNC膜は、4°Cで0.01M酢酸ナトリウム緩衝液pH 5.5に保存された場合、180日間で1日あたり最大8〜9回使用されました。
ジャックビーンズ（Canavalia endiformis）の市販のウレアーゼのナノ粒子（NP）凝集体は、脱溶媒和とグルタルアルデヒドの架橋により調製され、ジステアミンジヒドロ塩化によって官能化されました。これらの酵素ナノ粒子（ENP）は、透過型電子顕微鏡（TEM）、UVおよびフーリエ変換赤外線（FTIR）分光法によって特徴付けられました。ウレアーゼNPのTEM画像は、平均51.2nmの18〜100nmの範囲でサイズを示しました。ENPは、ネイティブの酵素分子よりも貯蔵寿命が長く、より活性で安定していました。ENPは、1.63mg/cm2の結合収率を持つ遊離尿素の初期活性の32.22％の保持を伴うグルタルアルデヒド結合を介して、グルタルアルデヒド結合を介してキトサン（CH）活性化ニトロセルロース（NC）膜に固定されました。このNC膜は、Oリングを備えたアンモニウムイオン選択電極（AISE）の下/敏感な端にマウントされ、次に電極をデジタルpHメーターに接続して、ポテンショメコリー測定尿素バイオセンサーを構築しました。バイオセンサーは、pH 5.5および40°Cで10秒以内に最適な応答を示しました。バイオセンサーは、明らかに健康な血清および腎臓障害に苦しむ人の血清における尿素のポテンショメコリー測定を測定するために採用されました。バイオセンサーには、2〜80µm/L（0.002-0.08mm）の幅広い作業範囲と23mV/10年の感度を持つ1µm/Lの低い検出限界が表示されました。血清中の尿素を追加した分析的回復は106.33％でした。現在のバイオセンサーのバリエーションの内およびバッチ係数（CV）は、それぞれ0.18％と0.32％でした。参照法（酵素比色キット法）によって得られた血清尿素値と現在のバイオセンサーとの間には、良好な相関（r = 0.99）がありました。バイオセンサーは、Na+、K+、NH+4、およびCa2+、Mg2+、Cu2+、およびAscorbin酸からの干渉がわずかでしたが、特定のイオン選択電極によって克服されたわずかな干渉がありました。ENPに結合したNC膜は、4°Cで0.01M酢酸ナトリウム緩衝液pH 5.5に保存された場合、180日間で1日あたり最大8〜9回使用されました。
The nanoparticles (NPs) aggregates of commercial urease from jack beans (Canavalia ensiformis) were prepared by desolvation and glutaraldehyde crosslinking and functionalized by cysteamine dihydrochloride. These enzyme nanoparticles (ENPs) were characterized by transmission electron microscopy (TEM), UV and Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy. The TEM images of urease NPs showed their size in the range, 18-100nm with an average of 51.2nm. The ENPs were more active and stable with a longer shelf life than native enzyme molecules. The ENPs were immobilized onto chitosan (CHIT) activated nitrocellulose (NC) membrane via glutaraldehyde coupling with 32.22% retention of initial activity of free ureaseNPs with a conjugation yield of 1.63mg/cm2. This NC membrane was mounted at the lower/sensitive end of the ammonium ion selective electrode (AISE) with O-ring and then electrode was connected to a digital pH meter to construct a potentiometric urea biosensor. The biosensor exhibited optimum response within 10s at pH 5.5and 40°C. The biosensor was employed for measurement of potentiometric determination of urea in sera of apparently healthy and persons suffering from kidney disorders. The biosensor displayed a low detection limit of 1µM/L with a wide working range of 2-80µM/L (0.002-0.08mM) and sensitivity of 23mV/decade. The analytical recovery of added urea in serum was 106.33%. The within and between-batch coefficient of variations (CVs) of present biosensor were 0.18% and 0.32% respectively. There was a good correlation (r = 0.99) between sera urea values obtained by reference method (Enzymic colorimetric kit method) and the present biosensor. The biosensor had negligible interference from Na+,K+,NH+4 and Ca2+ but Mg2+,Cu2+ and ascorbic acid but had slight interference, which was overcome by specific ion selective electrode. The ENPs bound NC membrane was used maximally 8-9 times per day over a period of 180 days, when stored in 0.01M sodium acetate buffer pH 5.5 at 4°C.
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