Tetrahymena pyriformisの線形ミトコンドリアDNAの細かい制限マップ：ゲノムサイズ、RRNAおよびTRNA遺伝子のマップ位置、末端反転繰り返し、および制限部位の多型

Tetrahymena pyriformis株STの線形ミトコンドリアDNAの細かい制限マップが提示されています。1.アガロースゲル電気泳動データと、いくつかの制限断片で利用可能な限られたヌクレオチド配列とともに、このゲノムの実際のサイズは約55,000塩基対と推定されます。2.ゲノムの長さに沿って散在する7つのtRNA遺伝子の位置が割り当てられています。これらの位置のうち6つは、TRNA（PHE）、TRNA（HIS）、TRNA（TRP）、およびTRNA（GLU）の遺伝子と、反転した末端反復セグメントにある重複tRNA（Tyr）遺伝子の遺伝子をコードします。1つの場所でエンコードされたtRNA遺伝子は特定されていません。以前にゲノムにコードされることが示されたTRNA（Leu）とTRNA（Met）遺伝子はまだ発見していません（Chiu etal。1974; Suyama 1982）。3. ECORIフラグメント8の170 bpセグメントを配列決定し、その配列を大腸菌16S rRNAと整列させることにより、14S RRNA遺伝子をマッピングしました。最近の完全なシーケンスデータから、遺伝子サイズは約1,650 bpであることがわかりました。これは、推定サイズが1,300 bpの14S RRNAで予想外に大きいことがわかりました。14S rRNAは、おそらく、5 '端の200〜300塩基が欠落しているより大きな一次転写産物の切断産物です。4.端子重複反転セグメントでの21S RRNA遺伝子の重複コピーを分析しました。Claiフラグメント7（1,500 bp）は、パラメシウムミトコンドリアDNAの20S rRNA遺伝子のベース位置850から2,390のベース位置850から2,390に対応しています（Seilhamer etal。1984b）。21S遺伝子の長さは約2,500 bpです。このセグメントでは、いくつかの制限部位の多型の存在が明らかです。5. 21S遺伝子コピーのそれぞれはtRNA（Tyr）遺伝子に先行しますが、1つのtRNA（TYR）遺伝子に隣接する空間は、サイズと制限部位が別のtRNA（TYR）遺伝子に隣接するスペースと制限部位が異なります。したがって、この空間は、Goldbachらのターミナル重複反転における不完全な一致のセグメントに対応しています。（1978a）。6. Saccharomyces cerevisiae Cob、AtPase VIおよびIX、およびシトクロムオキシダーゼI遺伝子配列、21Sおよび15S RRNA、およびマウスミトコンドリアDNAを含むミトコンドリアプローブは、テトラヒメナミトコンドリアDNAの拘束断片を伴う有意なハイブリダイゼーションを示しませんでした。結果は、以前に四字型ミトコンドリアゲノムで見られた広範な配列の発散に準拠しています（Goldbach etal。1977）。

A fine restriction map of the linear mitochondrial DNA of Tetrahymena pyriformis strain ST is presented. 1. Based on agarose gel electrophoresis data together with limited nucleotide sequences available on some restriction fragments, we estimate the actual size of this genome to be about 55,000 base pairs. 2. Seven tRNA gene locations have been assigned, which are scattered along the genome length. Six of these locations encode the genes for tRNA(phe), tRNA(his), tRNA(trp), and tRNA(glu), and the duplicate tRNA(tyr) genes which are located at the inverted terminal repeat segments. The tRNA gene(s) encoded in one location has not been identified. We have not yet found the tRNA(leu) and tRNA(met) genes, which were previously shown to be encoded in the genome (Chiu et al. 1974; Suyama 1982). 3. We have mapped the 14S rRNA gene by sequencing the 170 bp segment of EcoRI fragment 8 and by aligning its sequence with E. coli 16S rRNA. From our recent complete sequence data the gene size was found to be about 1,650 bp, which is unexpectedly large for the 14S rRNA which has an estimated size of 1,300 bp. The 14S rRNA is probably a cleavage product of the larger primary transcript of which 200-300 bases of the 5' end are missing. 4. The duplicate copies of the 21S rRNA gene at the terminal duplication inversion segments were analyzed. ClaI fragment 7 (1,500 bp) corresponds in sequence from base position 850 to 2,390 of the 20S rRNA gene of Paramecium mitochondrial DNA (Seilhamer et al. 1984b). The 21S gene is approximately 2,500 bp long. The presence of some restriction site polymorphism is apparent in this segment. 5. Each of the 21S gene copies precedes the tRNA(tyr) gene, but the space flanking one tRNA(tyr) gene differs in size and restriction sites from the space flanking another tRNA(tyr) gene. Thus, this space corresponds to the segment of an imperfect match in the terminal duplication inversion of Goldbach et al. (1978a). 6. Saccharomyces cerevisiae mitochondrial probes including Cob, ATPase VI and IX, and cytochrome oxidase I gene sequences, 21S and 15S rRNAs, and mouse mitochondrial DNA showed no significant hybridization with any restriction fragments of Tetrahymena mitochondrial DNA. The results are in accordance with an extensive sequence divergence previously found in the Tetrahymena mitochondrial genome (Goldbach et al. 1977).