in situ MHC-Tetramer染色と定量分析では、組織における抗原特異的CD8 T細胞の位置、存在量、表現型を決定する

T細胞は、ウイルス感染細胞の検出と除去、自己免疫の防止、B細胞および抗体の血漿細胞産生の支援、がん細胞の検出と除去など、多くの免疫学的プロセスにとって重要です。フローサイトメトリーによって分析された抗原特異的T細胞のMHCテトラマー染色の発達は、T細胞の免疫生物学を研究および理解する能力に革命をもたらしました。抗原特異的T細胞の量と表現型を決定するのに非常に役立ちますが、フローサイトメトリーは、組織内の他の細胞および構造への抗原特異的T細胞の空間局在を決定することはできません。現場では、MHC-Tetramer染色（IST）は、組織に関心のある抗原に特異的なT細胞を視覚化する手法です。免疫組織化学（IHC）と組み合わせて、ISTは組織における抗原特異的CD8およびCD4 T細胞の存在量、位置、および表現型を決定できます。ここでは、特定の表現型を特定の組織コンパートメント内に配置する抗原特異的CD8 T細胞を染色および列挙するプロトコルについて説明します。これらの手順は、「卵胞中のシミアン免疫不全ウイルス生産細胞は、in vivoのCD8+細胞によって部分的に抑制される」というタイトルのLi et al。による最近の出版物で使用したものと同じです。記載されている方法は、MHCテトラマーが利用可能な抗原特異的CD8 T細胞の局在化、表現型、および定量化に使用できるため、広く適用されます。

T cells are critical to many immunological processes, including detecting and eliminating virus-infected cells, preventing autoimmunity, assisting in B-cell and plasma-cell production of antibodies, and detecting and eliminating cancer cells. The development of MHC-tetramer staining of antigen-specific T cells analyzed by flow cytometry has revolutionized our ability to study and understand the immunobiology of T cells. While extremely useful for determining the quantity and phenotype of antigen-specific T cells, flow cytometry cannot determine the spatial localization of antigen-specific T cells to other cells and structures in tissues, and current disaggregation techniques to extract the T cells needed for flow cytometry have limited effectiveness in non-lymphoid tissues. In situ MHC-tetramer staining (IST) is a technique to visualize T cells that are specific for antigens of interest in tissues. In combination with immunohistochemistry (IHC), IST can determine the abundance, location, and phenotype of antigen-specific CD8 and CD4 T cells in tissues. Here, we describe a protocol to stain and enumerate antigen-specific CD8 T cells, with specific phenotypes located within specific tissue compartments. These procedures are the same that we used in our recent publication by Li et al., entitled "Simian Immunodeficiency Virus-Producing Cells in Follicles Are Partially Suppressed by CD8+ Cells In Vivo." The methods described are broadly applicable because they can be used to localize, phenotype, and quantify essentially any antigen-specific CD8 T cell for which MHC tetramers are available, in any tissue.