Borrelia burgdorferiの条件変異体の生成

成長または生存率に必要な細菌遺伝子の機能を特徴付けることを目的とした変異研究は、目的の遺伝子を欠く欠失株を生成できないことによって制約されます。この制限を回避するために、在来対立遺伝子の喪失を補うために、関心の遺伝子のコピーが細菌に導入される条件付き変異体を生成することができます。標的遺伝子の非ネイティブコピーの発現は、通常、誘導性プロモーターの制御下にあり、これにより、目的の遺伝子の制御可能で調節された生産が可能になります。条件付き変異体は、標的遺伝子の厳密に調節され、人為的に誘導可能なコピーを必要とする遺伝子の表現型分析にも広く有用です。ここでは、ボレリアに適応したLACオペレーター/リプレッサーシステムを利用して、ボレリアブルグドルフェリの条件付き変異クローンを生成および確認するために使用される方法について説明します。

Mutational studies aimed at characterizing the function(s) of bacterial genes required for growth or viability are constrained by the inability to generate deletion strains lacking the gene of interest. To circumvent this limitation, it is possible to generate conditional mutants in which a copy of the gene of interest is introduced into the bacteria to compensate for the loss of the native allele. Expression of the non-native copy of the target gene is typically under control of an inducible promoter, which allows for controllable and regulated production of the gene of interest. Conditional mutants are also broadly useful for phenotypic analyses of genes that require a tightly regulated and artificially inducible copy of the target gene. Herein, we describe the methods used to generate and confirm conditional mutant clones in Borrelia burgdorferi utilizing the Borrelia-adapted lac operator/repressor system.