[NY-ESO-1ペプチドで脈打つ樹状細胞によって誘発される特定のCTLS応答の免疫効果]

目的：特定の細胞毒性Tリンパ球（CTLS）応答と特異的CTLSの抗腫瘍性免疫機能を誘導する際に、キャナー/精巣抗原NY-ESO-1ペプチドでパルスした自己樹状細胞（DC）の可能性を調査する。 方法：IIからIII段階の陽性HLA -A0201+およびNY-ESO-1+の15人の患者は、2014年11月から2015年10月までの前臨床実験に基づいて、がん病院中国医学アカデミーに登録されました。（PBMC）および末梢血リンパ球（PBLS）が分離されました。PBMCはDCSに誘導され、NY-ESO-1ペプチドでパルスされました。DCの表現型は、HLA-DR+CD11C+、CD80+、CD83+、CD86+に対する抗体で染色され、その後マルチチャネルフローサイトメトリー（FCM）で分析されました。HLA-A0201結合ペプチドNY-ESO-1でパルスしたCTLSの殺害効果と、特定の細胞毒性Tリンパ球（CTLS）応答の誘導におけるNY-ESO-1ペプチドでパルスした自己DCの可能性が決定されました。患者には、2週間ごとに1回、自動型CTLの2つの注入が投与されました。総注入は2回でした。免疫学的反応と臨床反応は、最終投与の1週間後に調べられました。 結果：NY-ESO-1ペプチドでパルスしたDCSの免疫表現型を分析し、HLA-DR+ CD11C+細胞（93.6％±1.2％）、CD80+細胞（87.3％±3.6％）、CD83+細胞（82.8％±±2.5％）を分析しました。CD86+細胞（93.4％±6.4％）。NY-ESO-1ペプチドで豆類されたDCSによってプライミングされた患者から分離されたPBLは、連続的に増殖し、PBLの増殖指数（PI）を分析しました。ポリペプチドをロードしたDCSとアンロードされたものの間には有意な違いがありましたが、PBLSの増殖を促進する可能性がありましたが、PIはNY-ESO-1ペプチドをロードしたDCSのそれよりも有意に低かった（P <0.05）。NY-ESO-1ペプチドで豆類されたDCSによってプライミングされた特別なCTLの平均割合は、対照群の平均割合よりも有意に高かった（5.2％±1.2％対0.4％±0.1％）。NY-ESO-1パルスDCによって誘導されるCTLは、30：1としてE（効果）とT（ターゲット）の比率で、コントロールグループよりもNY-ESO-1ペプチドでパルスされたT2細胞株に強い殺害効果を発揮しました。、p <0.05。IFN-γ、IL-2、IL-12などの患者のセラのサイトカインレベルは、治療後に増加しました[（132.9±10.2）μg/L対（46.4±3.1）μg/L;（101.3±6.4）μg/L対（26.7±1.2）μg/L;（51.3±2.6）μg/L対（26.4±1.1）μg/L;すべてのp <0.05]、およびこれらの患者で抗原特異的CD8+ IFN-γ+の割合が増加しました（P <0.01）。 結論：NY-ESO-1ペプチドでパルスされたAuto-DCSは、in vivoまたはin vivoで特定の免疫応答を誘発する同種CTLの増殖を誘導する可能性があり、抗がん免疫を著しく高めます。

OBJECTIVE: To explore the potential of autologous dendritic cells (DCs) pulsed with caner/testis antigen NY-ESO-1 peptides in inducing specific cytotoxic T lymphocyte (CTLs) response and antineoplastic immune function of specific CTLs. METHODS: Fifteen patients with II to III stage positive HLA -A0201+ and NY-ESO-1+ were enrolled in the Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences on the basis of preclinical experiments from November 2014 to October 2015, and their peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and peripheral blood lymphocytes (PBLs) were isolated. The PBMCs were induced into DCs and pulsed with NY-ESO-1 peptide. The phenotypes of DCs were stained with antibodies against HLA-DR+CD11c+,CD80+,CD83+ and CD86+, and subsequently analyzed by multichannel flow cytometry (FCM). The killing effects of CTLs pulsed with HLA-A0201-binding peptide NY-ESO-1 and the potential of autologous DCs pulsed with NY-ESO-1 peptides in inducing specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) responses were determined. The patients were administered two infusions of auto-logous CTLs for 1 time every two weeks. The total infusion was with 2 times. The immunological responses and clinical responses were examined in 1 week after the final administration. RESULTS: The immunophenotype of DCs pulsed with NY-ESO-1 peptide was analyzed, HLA-DR+CD11c+ cells (93.6%±1.2%), CD80+ cells (87.3%±3.6%), CD83+ cells (82.8%±2.5%) and CD86+ cells (93.4%±6.4%). PBLs isolated from patients primed by DCs pulsed with NY-ESO-1 peptide proliferated continuously and the proliferation index (PI) of the PBLs were analyzed. There was significant difference between the DCs loaded with polypeptides and those unloaded, though it could promote the proliferation of PBLs, but the PI was significantly lower than that of the DCs loaded with NY-ESO-1 peptide (P<0.05). The average percentage of special CTLs primed by DCs pulsed with NY-ESO-1 peptides was significantly higher than that in the control group (5.2%±1.2% vs. 0.4%±0.1%). CTLs induced by NY-ESO-1 pulsed DCs exerted a stronger killing effect on T2 cell line pulsed with NY-ESO-1 peptide than that in the control group at the ratio of E (effect) to T (target) as 30:1, P<0.05. The cytokine levels in the patients'sera such as IFN-γ, IL-2 and IL-12 were increased after treatments [(132.9±10.2) μg/L vs. (46.4±3.1) μg/L; (101.3±6.4) μg/L vs. (26.7±1.2) μg/L; (51.3±2.6) μg/L vs. (26.4±1.1) μg/L; all P<0.05], and the percentages of antigen-specific CD8+IFN-γ+ increased in these patients (P<0.01). CONCLUSION: Auto-DCs pulsed with NY-ESO-1 peptides can induce the proliferation of allogenic CTLs, which elicit specific immune responses ex vivo or in vivo, and boost anticancer immunity markedly.