[CMS患者の核形成赤血球におけるRas、BRAF、MEK、ERK1/2の発現に対するERK1/2シグナル伝達経路阻害剤PD98059の効果]

目的：RAS、RAF、MEK、ERK1、ERK2発現に対するERK1 / 2シグナル伝達経路阻害剤PD98059の効果を調査するために、慢性山科目（CMS）の基礎研究と臨床治療のための新しい方法を探求します。 方法：16人のCMS患者を選択し、骨髄を単核細胞（MNC）の分離のために収集し、CD71およびCD235A抗体磁気ビーズを使用して細胞をソートし、その後、陽性細胞を5つのグループに分割しました：ブランクコントロール、DMSO、PD9805995、10、および20 µmol/L、および72時間低酸素状態で培養されました。上清中のRAS-GTPレベルはELISAによって検出され、RT-PCRを使用してBRAF、MEK、ERK1、ERK2 mRNAの核形成赤血球の発現を決定し、Westernブロット法を使用してBRAFの発現を検出しました。MEK、ERK1、ERK2タンパク質。 結果：PD98059は、各グループのRAS-GTPのレベルに影響を与えませんでした。空白のコントロールグループと比較して、DMSOグループのMEK mRNAのBRAFの発現レベルは統計的に有意ではありませんでした（P値は0.826、0.298）。PD98059 20 mol/Lグループと比較して、ERK1/2 mRNAの発現レベルは統計的に有意でした（P = 0.001、0.002）。ブランクコントロールグループと比較して、DMSOグループのp-braf、p-mekタンパク質の発現レベルは統計的に有意ではありませんでした（p = 0.370、0.351）。PD98059 20 mol/Lグループと比較して、他の4つのグループのp-ERK1/2タンパク質レベルの差は統計的に有意でした（P値は<0.001、0.007）。 結論：PD98059は、骨髄核形成赤血球におけるERK1 / 2 miRNAおよびP-ERK1 / 2タンパク質の発現をアップレギュレートできます。骨髄は赤血球を核形成し、RAS /RAF /MEK /ERK 1/2経路が慢性的な山病プロセスの病因に関与している可能性があることを示唆しています。

OBJECTIVE: To investigate the effect of ERK1 / 2 signaling pathway inhibitor PD98059 on Ras, Raf, MEK, ERK1, ERK2 expression in order to explore a new way for basic research and clinical treatment of the chronic mountain sickness(CMS). METHODS: Sixteen CMS patients were selected, the bone marrow was collected for isolation of monomuclear cells (MNC), the cells were sorted by using CD71 and CD235a antibody magnetic beads, then positive cells were diveded into 5 groups: blank control, DMSO and PD98059 5, 10 and 20 µmol/L, and were cultured in hypoxid condition for 72 hours. The Ras-GTP levels in supernatant was detected by ELISA, the RT-PCR was used to determine the expression of BRaf, MEK, ERK1, ERK2 mRNA in nucleated red blood cells, and the Western blot method was used to detect expression of BRaf, MEK, ERK1, ERK2 protein. RESULTS: PD98059 had no effect on the level of Ras-GTP in each groups. Compared with the blank control group, the expression levels of BRaf, MEK mRNA in DMSO group were not statistically significant (P values were 0.826, 0.298). Compared with the PD98059 20 mol/L group, the expression level of ERK1/2 mRNA was statistically significant (P=0.001, 0.002). Compared with the blank control group, expression levels of p-BRaf, p-MEK protein in DMSO group were not statistically significant (P=0.370, 0.351). Compared with the PD98059 20 mol/L group, the difference of p-ERK1/2 protein level in other 4 groups were statistically significant (P values were <0.001, 0.007). CONCLUSION: PD98059 can up-regulate the expressions of ERK1/2 miRNA and p-ERK1/2 protein in bone marrow nucleated red blood cells, the Ras / Raf / MEK / ERK 1/2 pathway is the main signal transduction pathway in regulating bone marrow nucleated red blood cells, suggesting that Ras/Raf /MEK /ERK 1/2 pathway may be involved in the pathogenesis of chronic mountain sickness process.