Ecobody Technology：抗原結合フラグメント形成のための細胞のないタンパク質合成を使用した単一B細胞からの迅速なモノクローナル抗体スクリーニング法

逆転写（RT）-PCRおよび大腸菌細胞のないタンパク質合成（CFPS）を使用して、単一の動物B細胞からの迅速かつ費用対効果の高いモノクローナル抗体スクリーニング法を報告します。このプロセスは「Ecobody Technology」という名前です。この方法には、抗原を免疫動物の末梢血から特異的に結合するB細胞を分離する戦略、および単一細胞RT-PCRをVHおよびVL遺伝子のDNAフラグメントを生成し、続いて抗原結合の断片の産生のためのCFPが続く（ファブ）。CFPSステップでは、1） 'zipbody'がFabを生産する方法として採用しました。これは、FABのC末端で融合した接着剤ロイシンジッパーペプチドによって促進されるFABを生産する方法として促進しました。2）タンパク質発現レベルを上げることができるN末端Skikペプチドタグ。Ecobody Technologyを使用して、抗原Vibrio Parahaemolyticusおよび大腸菌O26の高度に特異的なモノクローナル抗体を取得しました。反V。Parahaemolyticus Zipbody MABは、包摂体の大腸菌株Shuffle T7 Expressでさらに産生され、従来の方法によって繰り返され、有意な抗原結合活性（K d = 469 pm）と8.5 mgの精製抗体/L-培養の生産性をもたらしました。

We report a rapid and cost-effective monoclonal antibody screening method from single animal B cells using reverse transcription (RT)-PCR and Escherichia coli cell-free protein synthesis (CFPS), which allows evaluation of antibodies within 2 working days. This process is named "Ecobody technology". The method includes strategies to isolate B cells that specifically bind an antigen from the peripheral blood of immunised animals, and single-cell RT-PCR to generate DNA fragments of the VH and VL genes, followed by CFPS for production of fragments of antigen binding (Fab). In the CFPS step, we employed our techniques: 1) 'Zipbody' as a method for producing Fab, in which the association of heavy and light chains is facilitated by adhesive leucine zipper peptides fused at the C-termini of the Fab; and 2) an N-terminal SKIK peptide tag that can increase protein expression levels. Using Ecobody technology, we obtained highly-specific monoclonal antibodies for the antigens Vibrio parahaemolyticus and E. coli O26. The anti-V. parahaemolyticus Zipbody mAb was further produced in E. coli strain SHuffle T7 Express in inclusion bodies and refolded by a conventional method, resulting in significant antigen-binding activity (K D = 469 pM) and productivity of 8.5 mg purified antibody/L-culture.