プロピジウムモノアジド/ナトリウムの前処理ラウロイルサルコシネートは、磁気分離と組み合わせたRT-QPCRによる感染性水媒介ウイルスの識別を改善します

RT-QPCRは、水環境における感染性および非感染性ウイルスの両方のウイルス粒子を感度的に検出することを可能にしますが、感染性ウイルスと非感染性を区別することはできません。この研究では、モノアジドと損傷したウイルス性カプシドを効率的に浸透させる可能性のある洗剤との最適な組み合わせで、前処理による懸濁液中の塩素不活性化ヒトロウイルス（NOV）およびコショウの軽度の斑状ウイルス（PMMOV）のRT-QPCRベースの検出を最適化することを目的としました。4つの方法を比較して、塩素消毒の有効性（1、3、および5分mg/Lで）を決定しました：（a）RT-QPCRのみ、（b）ウイルス粒子の濃縮のための磁気ビーズ分離（MBS-RT-QPCR）、（C）MBS-RT-QPCR MonoazidiumのMBS-RT-RT-QPCR Ackを使用したMBS-RT-RT-QPCR Ackを使用したMBS-RT-RT-QPCR Ackを使用（PMA-MBS-RT-QPCR）、および（d）Lauroyl Sarcosinate（Inci-PMA-MBS-RT-QPCR）による前処理によるPMA-MBS-RT-QPCRアッセイ。PMA最適化アッセイに基づいて、それぞれ200および300μMPMAがNOV GII.4およびPMMOVのその後の実験で使用されました。NOV GII.4およびPMMOVへの影響が最小限の最適なINCI濃度は、それぞれ0.5％および0.2％INCIであることがわかりました。11月GII.4では、PMA処理されたサンプルとInci+PMA処理サンプルの間にLog10ゲノムコピーに有意差（p <0.05）がありました（Log10ゲノムコピーは、それぞれ1.11と0.59 Log10によって異なり、3分および5分mg/Lの塩素が異なります）。PMMOVの場合、INCIは、それぞれ1、3、および5分間の塩素の0.92、1.18、および1.86のLOG10ゲノムコピーの違いを誘発しました。全体として、この研究の結果は、PMAとINCIの最適な組み合わせが、水処理戦略における消毒方法の評価に非常に役立つ可能性があることを示しています。

RT-qPCR allows sensitive detection of viral particles of both infectious and noninfectious viruses in water environments, but cannot discriminate non-infectious from infectious viruses. In this study, we aimed to optimize RT-qPCR-based detection of chlorine-inactivated human norovirus (NoV) and pepper mild mottle virus (PMMoV) in suspension by pretreatment with an optimal combination of a monoazide and a detergent that can efficiently penetrate damaged viral capsids. Four methods were compared to determine the efficacy of chlorine disinfection (at 1, 3, and 5 min mg/L): (A) RT-qPCR alone, (B) RT-qPCR assay preceded by magnetic bead separation for enrichment of viral particles (MBS-RT-qPCR), (C) MBS-RT-qPCR assay with pretreatment with propidium monoazide (PMA-MBS-RT-qPCR), and (D) PMA-MBS-RT-qPCR assay with pretreatment with sodium lauroyl sarcosinate (INCI-PMA-MBS-RT-qPCR). On the basis of a PMA optimization assay, 200 and 300 μM PMA were used in subsequent experiments for NoV GII.4 and PMMoV, respectively. Optimal INCI concentrations, having minimal influence on NoV GII.4 and PMMoV, were found to be 0.5% and 0.2% INCI, respectively. For NoV GII.4, there were significant differences (P < 0.05) in log10 genome copies between the PMA-treated and the INCI + PMA-treated samples (log10 genome copies differed by 1.11 and 0.59 log10 for 3 and 5 min mg/L of chlorine, respectively). For PMMoV, INCI induced differences in log10 genome copies of 0.92, 1.18, and 1.86, for 1, 3, and 5 min mg/L of chlorine, respectively. Overall, the results of this study indicate that an optimal combination of PMA and INCI could be very useful for evaluating disinfection methods in water treatment strategies.