脂肪可溶性ビタミンと抗酸化物質の高性能液体クロマトグラフィー分析のための選択された生物液のシングルステップ調製

脂溶性ビタミンと抗酸化物質は、健康と病気に関連しています。生物液からこれらの化合物を抽出する現在の方法は、主にマルチステップとマルチオーガニック溶媒を使用する必要があります。それらは時間がかかり、同時に大きなサンプル番号を扱うために適用するのが困難です。ここでは、生物液からの脂肪可溶性ビタミンと抗酸化物質の単一段階の溶媒抽出、および全トランス - レチノイン酸のクロマトグラフィー分離、25-ヒドロキシコレカルシフェロール、オールトランス - レチノール、アスタキシン、ルテイン、Zeaxanthin、トランス-β-APO-8'-カロテナル、γ-トコフェロール、β-クリプトキサンチン、α-トコフェロール、フィロキノン、リコピン、α-カロチン、β-カロチンおよびコエンザイムQ10。抽出は、1容量の生物液を2つのアセトニトリル容積に加え、60代のボルテックスを加え、攪拌下で37°Cで60分間インキュベートすることにより得られます。HPLCの分離は、ハイパーシルC18、100×4.6mm、5μm粒子サイズカラム、70％メタノール+30％H2Oから100％アセトニトリル、1.0ml/min、37°C​​カラム温度の勾配を使用して30分間に発生します。化合物は、高感度のUV-VISダイオードアレイ検出器を使用して明らかになります。HPLCメソッドの適合性は、感度、再現性、回復の観点から評価されました。現在の抽出およびクロマトグラフィー条件を使用して、文献で見られるものと同様の50人の健康な対照から血清中の脂肪可溶性ビタミンと抗酸化物質の値を得ました。さらに、これらの化合物のプロファイルは、20人の健康な肥沃なドナーからの精力的な血漿でも測定されました。結果は、このシンプルで高速で低コストのサンプル処理が、生物液から脂肪可溶性ビタミンと抗酸化物質を抽出するのに適しており、臨床的および栄養研究に適用できることを示しています。

Fat-soluble vitamins and antioxidants are of relevance in health and disease. Current methods to extract these compounds from biological fluids mainly need use of multi-steps and multi organic solvents. They are time-consuming and difficult to apply to treat simultaneously large sample number. We here describe a single-step, one solvent extraction of fat-soluble vitamins and antioxidants from biological fluids, and the chromatographic separation of all-trans-retinoic acid, 25-hydroxycholecalciferol, all-trans-retinol, astaxanthin, lutein, zeaxanthin, trans-β-apo-8'-carotenal, γ-tocopherol, β-cryptoxanthin, α-tocopherol, phylloquinone, lycopene, α-carotene, β-carotene and coenzyme Q10. Extraction is obtained by adding one volume of biological fluid to two acetonitrile volumes, vortexing for 60s and incubating for 60min at 37°C under agitation. HPLC separation occurs in 30min using Hypersil C18, 100×4.6mm, 5μm particle size column, gradient from 70% methanol+30% H2O to 100% acetonitrile, flow rate of 1.0ml/min and 37°C column temperature. Compounds are revealed using highly sensitive UV-VIS diode array detector. The HPLC method suitability was assessed in terms of sensitivity, reproducibility and recovery. Using the present extraction and chromatographic conditions we obtained values of the fat-soluble vitamins and antioxidants in serum from 50 healthy controls similar to those found in literature. Additionally, the profile of these compounds was also measured in seminal plasma from 20 healthy fertile donors. Results indicate that this simple, rapid and low cost sample processing is suitable to extract fat-soluble vitamins and antioxidants from biological fluids and can be applied in clinical and nutritional studies.