ハイスループット抗体選択のための磁気ナノ粒子ベースの半自動パン

組換えヒト抗体の適用は、主に診断と治療の分野で急速に成長しています。特定の抗原に対する抗体を識別するために、異なるディスプレイ技術を使用してパン化選択が実行されます。ファージディスプレイテクノロジーは、バイオパンニング実験における堅牢性と効率性のため、依然として好ましいプラットフォームです。固体表面として、ポリスチレンプラスチック、磁気ビーズ、ニトロセルロースを使用した手動および半自動の両方のパンニング選択があります。磁気ナノ粒子により、表面積が大きいため、抗原結合が改善されます。Kinghisher Flex磁気粒子処理システムは、もともと磁気ビーズを使用したRNA、DNA、およびタンパク質抽出を支援するように設計されていました。ただし、システムは抗体ファージディスプレイパンのためにプログラムできます。この自動化により、人為的エラーの減少が可能になり、事前にプログラムされた動きを伴う選択の合間に再現性が向上します。システムは、動作するために最小限の人間の介入を必要とします。ただし、Phage Rescueのようなパンパン後の手順には、人間の介入が必要です。さらに、半自動プラットフォームを使用してポリクローナルおよびモノクローナルELISAを実行して、選択した抗体クローンを評価できます。この章では、パンニング段階からモノクローナルELISA評価まで提案されたプロトコルを要約します。これ以外に、この章の最後に、最適化とトラブルシューティングの可能性に関する重要なメモも含まれています。

The application of recombinant human antibodies is growing rapidly mainly in the field of diagnostics and therapeutics. To identify antibodies against a specific antigen, panning selection is carried out using different display technologies. Phage display technology remains the preferred platform due to its robustness and efficiency in biopanning experiments. There are both manual and semi-automated panning selections using polystyrene plastic, magnetic beads, and nitrocellulose as the immobilizing solid surface. Magnetic nanoparticles allow for improved antigen binding due to their large surface area. The Kingfisher Flex magnetic particle processing system was originally designed to aid in RNA, DNA, and protein extraction using magnetic beads. However, the system can be programmed for antibody phage display panning. The automation allows for a reduction in human error and improves reproducibility in between selections with the preprogrammed movements. The system requires minimum human intervention to operate; however, human intervention is needed for post-panning steps like phage rescue. In addition, polyclonal and monoclonal ELISA can be performed using the semi-automated platform to evaluate the selected antibody clones. This chapter will summarize the suggested protocol from the panning stage till the monoclonal ELISA evaluation. Other than this, important notes on the possible optimization and troubleshooting are also included at the end of this chapter.