エラーが発生しやすいPCRによる抗体親和性と安定性成熟

抗体は、医薬品タンパク質の最も急速に成長しているクラスであり、研究と診断のための必須ツールです。多くの場合、抗体は望ましい特異性プロファイルを示しますが、望ましいアプリケーションには十分な親和性がありません。ここでは、変異誘発ファージディスプレイライブラリーの構築に基づいて組換え抗体断片の親和性を高める方法について説明します。誤差が発生しやすいPCRにより、変異抗体遺伝子ライブラリーの構築後、高親和性変異体の選択は、パンニングによって実行されます。溶液中または固定化された抗原では、洗浄状態でオフレート依存の選択用に最適化されています。熱安定性が改善された抗体を特定するための追加のスクリーニングプロトコルについて説明します。

Antibodies are the fastest growing class of pharmaceutical proteins and essential tools for research and diagnostics. Often antibodies do show a desirable specificity profile but lack sufficient affinity for the desired application. Here, we describe a method to increase the affinity of recombinant antibody fragments based on the construction of mutagenized phage display libraries.After the construction of a mutated antibody gene library by error-prone PCR, selection of high-affinity variants is either performed by panning in solution or on immobilized antigen with washing conditions optimized for off-rate-dependent selection. An additional screening protocol to identify antibodies with improved thermal stability is described.