アムホテリシンBコッパー（II）複合体は、腎細胞における形質転換因子ベータファミリーメンバーおよび関連タンパク質をコードする遺伝子の転写活性を変化させる

背景：アンホテリシンB（AMB）の毒性を克服するために、いくつかの化学的修飾が開発されました。治療中に患者の循環で発生する可能性のある酸化型のAMB（AMB-ox）は、AMBと同じくらい毒性があります。銅（II）イオン（AMB-CU2+）を含む複合体は、ヒト細胞に対する毒性が低いことが報告されています。以前の研究では、AMBが形質転換成長因子ベータ（TGF-β）の発現を変化させることが示されました。したがって、この研究の目的は、腎細胞におけるTGF-βファミリーメンバーおよび関連タンパク質をコードする遺伝子の発現に対するAMBとその修正形態の影響を調査することでした。 方法：ヒト腎近位尿細管細胞（RPTEC）を、AMB-CU2+、AMB、または酸化型のAMB-oxで処理しました。TGF-βファミリーメンバーおよび関連遺伝子の発現は、オリゴヌクレオチドマイクロアレイを使用して決定されました。TGF-β1タンパク質レベルは、ELISAメソッドを使用して決定されました。TGF-βアイソフォーム、TGF-β受容体および分化遺伝子のmRNAレベルは、リアルタイムRT-QPCRによって評価されました。 結果：AMB-CU2+は、TGF-β1およびTGF-β2アイソフォームのmRNAレベルと、受容体をコードする2つの遺伝子、TGFBR1およびTGFBR2を増加させました。培地中のTGF-β1タンパク質レベルは、AMB-Cu2+での刺激後に増加しませんでした。マイクロアレイ分析により、促進促進遺伝子と抗線維性遺伝子の両方の変化が明らかになりました。 結論：これらの結果は、AMB-Cu2+が細胞内シグナル伝達に関与する遺伝子の発現の変化を介して腎近位尿細管細胞の修復メカニズムを誘導する可能性があることを示唆しています。

BACKGROUND: Several chemical modifications have been developed to overcome the toxicity of amphotericin B (AmB). Oxidized forms of AmB (AmB-ox), which may occur in patient's circulation during therapy, are as toxic as AmB. Complexes with copper (II) ions (AmB-Cu2+) have been reported to be less toxic to human cells. Previous studies showed that AmB changed the expression of transforming growth factor-beta (TGF-β). Therefore, the objective of this study was to investigate the influence of AmB and its modified forms on the expression of genes encoding for TGF-β family members and related proteins in renal cells. METHODS: Human renal proximal tubule cells (RPTEC) were treated with AmB-Cu2+, AmB, or the oxidized form AmB-ox. The expression of TGF-β family members and related genes was determined using oligonucleotide microarrays. TGF-β1 protein level was determined using ELISA method. The mRNA level of TGF-β isoforms, TGF-β receptors and differentiating genes was evaluated by real-time RT-qPCR. RESULTS: AmB-Cu2+ increased the mRNA levels of TGF-β1 and TGF-β2 isoforms and two genes encoding receptors: TGFBR1 and TGFBR2. TGF-β1 protein level in culture medium was not increased after stimulation with AmB-Cu2+. Microarray analysis revealed changes in both pro-fibrotic and anti-fibrotic genes. CONCLUSIONS: These results suggest that AmB-Cu2+ may induce repair mechanisms in renal proximal tubule cells via changes in the expression of genes involved in intracellular signaling.