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問題：古典的な主要組織適合性複合体（MHC）クラスI（MHC-IA）および非古典的なMHCクラスI（MHC-IB）遺伝子の微分発現を支配する調節メカニズムはあまり理解されていません。 研究方法：定量的逆転写 - ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を使用して、末梢血単核細胞（PBMC）および胎盤栄養膜芽細胞（PTC）のMHC-I転写産物と関連する転写因子を比較しました。MHC-I CPG島のメチル化は、ビスル酸塩処理と次世代シーケンスによって検出されました。5'-aza-deoxytidineによるPBMCおよびPTCの脱メチル化を使用して、遺伝子調節におけるメチル化の役割を評価しました。 結果：MHC-I発現はPBMCの方がPTCよりも高く、IRF1、クラスII MHCトランス活性化因子（CIITA）、およびSTAT1の発現と相関していました。MHC-IA遺伝子とBOLA-NC1には、PBMCおよびPTCのCPGメチル化が欠けていました。対照的に、Bola -NC2、-NC3、および-NC4の遺伝子体内のCPG部位はPBMCで高度にメチル化されていましたが、正常なPTCではほとんどメチル化されておらず、体細胞核移動PTCで中程度にメチル化されました。PBMCでは、脱メチル化によりMHC-IBが2.8〜6倍上方制御されましたが、MHC-IA転写産物は2倍未満に上昇しました。 結論：DNAメチル化はウシMHC-IB発現を調節し、PBMCおよびPTCのMHC-IBからMHC-IA転写産物の異なる相対レベルの原因となる可能性があります。
問題：古典的な主要組織適合性複合体（MHC）クラスI（MHC-IA）および非古典的なMHCクラスI（MHC-IB）遺伝子の微分発現を支配する調節メカニズムはあまり理解されていません。 研究方法：定量的逆転写 - ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を使用して、末梢血単核細胞（PBMC）および胎盤栄養膜芽細胞（PTC）のMHC-I転写産物と関連する転写因子を比較しました。MHC-I CPG島のメチル化は、ビスル酸塩処理と次世代シーケンスによって検出されました。5'-aza-deoxytidineによるPBMCおよびPTCの脱メチル化を使用して、遺伝子調節におけるメチル化の役割を評価しました。 結果：MHC-I発現はPBMCの方がPTCよりも高く、IRF1、クラスII MHCトランス活性化因子（CIITA）、およびSTAT1の発現と相関していました。MHC-IA遺伝子とBOLA-NC1には、PBMCおよびPTCのCPGメチル化が欠けていました。対照的に、Bola -NC2、-NC3、および-NC4の遺伝子体内のCPG部位はPBMCで高度にメチル化されていましたが、正常なPTCではほとんどメチル化されておらず、体細胞核移動PTCで中程度にメチル化されました。PBMCでは、脱メチル化によりMHC-IBが2.8〜6倍上方制御されましたが、MHC-IA転写産物は2倍未満に上昇しました。 結論：DNAメチル化はウシMHC-IB発現を調節し、PBMCおよびPTCのMHC-IBからMHC-IA転写産物の異なる相対レベルの原因となる可能性があります。
PROBLEM: The regulatory mechanisms governing differential expression of classical major histocompatibility complex (MHC) class I (MHC-Ia) and non-classical MHC class I (MHC-Ib) genes are poorly understood. METHOD OF STUDY: Quantitative reverse transcription- polymerase chain reaction (PCR) was used to compare the abundance of MHC-I transcripts and related transcription factors in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and placental trophoblast cells (PTC). Methylation of MHC-I CpG islands was detected by bisulfite treatment and next-generation sequencing. Demethylation of PBMC and PTC with 5'-aza-deoxycytidine was used to assess the role of methylation in gene regulation. RESULTS: MHC-I expression was higher in PBMC than PTC and was correlated with expression of IRF1, class II MHC transactivator (CIITA), and STAT1. The MHC-Ia genes and BoLA-NC1 were devoid of CpG methylation in PBMC and PTC. In contrast, CpG sites in the gene body of BoLA-NC2, -NC3, and -NC4 were highly methylated in PBMC but largely unmethylated in normal PTC and moderately methylated in somatic cell nuclear transfer PTC. In PBMC, demethylation resulted in upregulation of MHC-Ib by 2.8- to 6-fold, whereas MHC-Ia transcripts were elevated less than 2-fold. CONCLUSION: DNA methylation regulates bovine MHC-Ib expression and is likely responsible for the different relative levels of MHC-Ib to MHC-Ia transcripts in PBMC and PTC.
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