インターフェロン-γ誘導性タンパク質16（IFI16）は、エプスタインバーウイルスのレイテンシの維持に必要です

背景：Epstein-Barr Virus（EBV）は、感染した個人で溶解性と潜在性（Lat。I、II、およびIII）の両方のフェーズを示します。Burkittのリンパ腫、鼻咽頭癌、リンパ増殖性疾患を含むすべてのEBV関連の癌がEBVの潜在相中にあります。インターフェロン-γ誘導性タンパク質16（IFI16）は、DNAウイルスの侵入に応じて、確立された自然免疫センサーおよびウイルス転写調節因子です。潜時中、IFI16は核内に残り、部分的にはEBVゲノムに拘束されます。ただし、EBV溶解サイクルやレイテンシにおけるその役割は確立されていません。 方法：IFI16およびIFI16の過剰発現に対する短い干渉RNAを使用して、EBV潜時Iの維持におけるIFI16の役割を特定しました。また、溶解サイクルの誘導がEBV陽性、潜在的に感染したAkataまたはMutu-1細胞を使用してIFI16にどのように影響したかを研究しました。線。アカタ細胞は、TGF-βを最大96時間でTPAおよびMutu-1細胞で誘導し、IFI16タンパク質の変化をウエスタンブロッティングおよび免疫蛍光顕微鏡により分析しました。IFI16減少のメカニズムを評価するために、ウイルスDNAポリメラーゼ阻害剤ホスホノ酢酸を使用して、EBV DNA複製と後期溶解転写産物をブロックしました。 結果：siRNAによるIFI16 mRNAのノックダウンは、すべての側頭遺伝子クラスからのEBV溶解遺伝子発現のレベルの増加と、総EBVゲノム存在量の増加をもたらしましたが、外因性IFI16の過剰発現はこれらの効果を逆転させました。さらに、TPA（Akata）またはTGF-β（Mutu-1）のいずれかで溶解サイクルを誘導してから96時間後、IFI16タンパク質レベルはEBV陰性細胞株BJABと比較して最大80％減少しました。IFI16の減少は、EBV溶原糖タンパク質を発現する細胞で観察されました。IFI16タンパク質のレベルの低下は、EBVの後期溶解転写産物に依存していないようには見えませんが、早期、早期、または両方の遺伝子クラスの組み合わせの関与を示唆しています。 結論：溶解循環誘導後のIFI16タンパク質レベルの低下、およびIFI16 mRNAノックダウン後の潜時からの再活性化は、IFI16がEBV潜時の維持に重要であることを示唆しています。さらに重要なことに、これらの結果は、IFI16がEBVライフサイクルに関与するユニークな宿主因子タンパク質として特定し、EBV関連の悪性腫瘍と戦うための潜在的な治療標的となっています。

BACKGROUND: Epstein-Barr virus (EBV) exhibits both lytic and latent (Lat. I, II, and III) phases in an infected individual. It's during the latent phase of EBV that all EBV-associated cancers, including Burkitt's lymphoma, nasopharyngeal carcinoma and lymphoproliferative disease arise. Interferon-γ-inducible protein 16 (IFI16) is a well-established innate immune sensor and viral transcriptional regulator involved in response to invading DNA viruses. During latency, IFI16 remains in the nucleus, in part bound to the EBV genome; however, neither its role in EBV lytic cycle or latency has been established. METHODS: Short interfering RNA against IFI16 and IFI16 overexpression were used to identify the role of IFI16 in the maintenance of EBV latency I. We also studied how induction of the lytic cycle affected IFI16 using the EBV positive, latently infected Akata or MUTU-1 cell lines. Akata cells were induced with TPA and MUTU-1 cells with TGF-β up to 96 h and changes in IFI16 protein were analyzed by Western blotting and immunofluorescence microscopy. To assess the mechanism of IFI16 decrease, EBV DNA replication and late lytic transcripts were blocked using the viral DNA polymerase inhibitor phosphonoacetic acid. RESULTS: Knockdown of IFI16 mRNA by siRNA resulted in enhanced levels of EBV lytic gene expression from all temporal gene classes, as well as an increase in the total EBV genome abundance, whereas overexpression of exogenous IFI16 reversed these effects. Furthermore, 96 h after induction of the lytic cycle with either TPA (Akata) or TGF-β (MUTU-1), IFI16 protein levels decreased up to 80% as compared to the EBV-negative cell line BJAB. Reduction in IFI16 was observed in cells expressing EBV lytic envelope glycoprotein. The decreased levels of IFI16 protein do not appear to be dependent on late lytic transcripts of EBV but suggest involvement of the immediate early, early, or a combination of both gene classes. CONCLUSIONS: Reduction of IFI16 protein levels following lytic cycle induction, as well as reactivation from latency after IFI16 mRNA knockdown suggests that IFI16 is crucial for the maintenance of EBV latency. More importantly, these results identify IFI16 as a unique host factor protein involved in the EBV lifecycle, making it a potential therapeutic target to combat EBV-related malignancies.