著名医師による解説が無料で読めます
すると翻訳の精度が向上します
積分膜タンパク質は、さまざまな細胞機能において中心的な役割を果たし、重要な治療標的です。しかし、膜タンパク質の過剰発現と精製における技術的課題は、しばしば生化学的および構造研究の制限要因を表しています。ここでは、昆虫細胞に切断可能なN末端シグナルペプチドを使用してタンパク質を発現するために使用できるマルチバックベクターの誘導体のセットを構築しました。これらのベクターは、小胞体（ER）への転座のためにシグナル認識粒子を必要とするI型膜タンパク質およびその他の分泌経路タンパク質の発現について提案します。3×フラグとツインスレップを含むN末端およびC末端のアフィニティタグのベクトルコードは、ERへの効率的な転座と、タンパク質の構造と機能を維持する穏やかな条件下での精製と互換性のあるタグを表します。モデルとして、私たちのシステムを使用して、そのガンマサブユニット（γ鎖）と複合的に、操作された高親和性免疫グロブリンFC受容体I（CD64）を発現および精製しました。γ鎖と複合的に発現したCD64は、免疫グロブリンG（IgG）結合で機能していることを実証します。IgGとの複合体中のCD64の堆積は、高分子重量複合体の形成に加えて、個々のCD64/IgG複合体を示唆しています。要約すると、当社のベクターは、膜タンパク質、他の分泌経路タンパク質、およびそのタンパク質複合体の発現のためのツールとして使用できます。
積分膜タンパク質は、さまざまな細胞機能において中心的な役割を果たし、重要な治療標的です。しかし、膜タンパク質の過剰発現と精製における技術的課題は、しばしば生化学的および構造研究の制限要因を表しています。ここでは、昆虫細胞に切断可能なN末端シグナルペプチドを使用してタンパク質を発現するために使用できるマルチバックベクターの誘導体のセットを構築しました。これらのベクターは、小胞体（ER）への転座のためにシグナル認識粒子を必要とするI型膜タンパク質およびその他の分泌経路タンパク質の発現について提案します。3×フラグとツインスレップを含むN末端およびC末端のアフィニティタグのベクトルコードは、ERへの効率的な転座と、タンパク質の構造と機能を維持する穏やかな条件下での精製と互換性のあるタグを表します。モデルとして、私たちのシステムを使用して、そのガンマサブユニット（γ鎖）と複合的に、操作された高親和性免疫グロブリンFC受容体I（CD64）を発現および精製しました。γ鎖と複合的に発現したCD64は、免疫グロブリンG（IgG）結合で機能していることを実証します。IgGとの複合体中のCD64の堆積は、高分子重量複合体の形成に加えて、個々のCD64/IgG複合体を示唆しています。要約すると、当社のベクターは、膜タンパク質、他の分泌経路タンパク質、およびそのタンパク質複合体の発現のためのツールとして使用できます。
Integral membrane proteins play a central role in various cellular functions and are important therapeutic targets. However, technical challenges in the overexpression and purification of membrane proteins often represent a limiting factor for biochemical and structural studies. Here, we constructed a set of vectors, derivatives of MultiBac vectors that can be used to express proteins with a cleavable N-terminal signal peptide in insect cells. We propose these vectors for expression of type I membrane proteins and other secretory pathway proteins that require the signal recognition particle for translocation to the endoplasmic reticulum (ER). The vectors code for N-terminal and C-terminal affinity tags including 3 × FLAG and Twin-Strep, which represent tags compatible with efficient translocation to the ER as well as with purification under mild conditions that preserve protein structure and function. As a model, we used our system to express and purify the engineered high-affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I (CD64) in complex with its gamma subunit (γ-chain). We demonstrate that CD64 expressed in complex with the γ-chain is functional in immunoglobulin G (IgG) binding. The sedimentation of CD64 in complex with IgG suggests individual CD64/IgG complexes in addition to formation of high-molecular weight complexes. In summary, our vectors can be used as a tool for expression of membrane proteins, other secretory pathway proteins and their protein complexes.
医師のための臨床サポートサービス
ヒポクラ x マイナビのご紹介
無料会員登録していただくと、さらに便利で効率的な検索が可能になります。