バルプロ酸とその5つの代謝産物の同時定量化のための迅速かつ単純なHPLC-MS/MSメソッドと、中国のてんかん患者の薬物動態相互作用を研究するための応用

バルプロ酸（VPA）は、単剤療法またはラモトリギン（LTG）などの他の抗けいれん薬との組み合わせでてんかんの治療に使用される古典的な薬です。VPAは臨床診療におけるラモトリギントラフ濃度を増加させる可能性があると報告されていましたが、VPAおよびその主要な代謝物のトラフ濃度に対するLTGの影響についての報告はありませんでした。-OH-VPA、3-ケト-VPA、2-PGAは、VPAの治療および毒性効果に関連しています。この研究では、HPLC-MS/MSを使用したヒト血漿中のVPAとその5つの代謝物を同時に決定するための簡単かつ迅速な方法が初めて開発されました。ベンゾ酸は内部標準として使用されました（IS）。0.3ml/minの流量での移動相として、アセトニトリル：10mm酢酸アンモニウム溶液（90:10、v/v）を使用したIsocratic溶出により、Hypersil Gold C18カラムで分離を行いました。ネガティブイオンスイッチングで動作するトリプル四重極質量分析計、選択反応モニタリング（SRM）を備えた電子スプレーイオン化モード（SRM）を使用して、M/Z 143.183→143.183、157.033→113.165、173.017→129.074、159.0582、1401.082、149.0582、149.074、157.033→113.165、173.017→140。870、159.049→123.076、121.035→77.136 VPA、2-PGA、3-Keto-VPA、3-OH-VPA、4-ene-VPA、4-OH-VPAおよびIS。この方法は、感度、特異性、精度（内部およびバッチ内およびバッチ間）、精度、回復、マトリックス効果、安定性の観点からも満足のいく結果をもたらしました。この方法は、中国のてんかん患者におけるVPA、2-PGA、3-Keto-VPA、3-OH-VPA、4-ene-VPA、4-OH-VPAのトラフ濃度に対するLTGの効果を評価するために成功裏に適用されました。結果は、VPA単剤療法の患者とVPAとLTGを組み合わせた治療中の患者の間でVPAとその5つの代謝物の濃度に有意な差がなかったことを示しました。

Valproic acid(VPA) is a classic drug that used to treat epilepsy in monotherapy or combination with other anticonvulsant drugs such as lamotrigine (LTG). Although it was reported that VPA could increase lamotrigine trough concentration in clinical practice, there was no report about the effect of LTG on the trough concentration of VPA and its main metabolites, such as 4-ene-VPA, 3-OH-VPA, 4-OH-VPA, 3-keto-VPA, 2-PGA which are related to the therapeutic and toxic effects of VPA. In this study, a simple and rapid method for the simultaneous determination of VPA and its five metabolites in human plasma using HPLC-MS/MS was developed for the first time. Benzoic acid was used as an internal standard (IS). Separation was performed on a Hypersil GOLD C18 column by isocratic elution using acetonitrile: 10mM ammonium acetate solution (90:10, v/v) as mobile phase at a flow rate of 0.3mL/min. A triple quadrupole mass spectrometer operating in the negative ion-switching, electron spray ionization mode with selection reaction monitoring (SRM) was employed to determine transitions of m/z 143.183→143.183, 157.033→113.165, 173.017→129.074, 159.058→101.082, 140.870→140. 870, 159.049→123.076, 121.035→77.136 for VPA, 2-PGA, 3-keto-VPA, 3-OH-VPA, 4-ene-VPA, 4-OH-VPA and IS, respectively. The method also afforded satisfactory results in terms of sensitivity, specificity, precision (intra- and inter-batch), accuracy, recovery, matrix effect and stability. This method was successfully applied to evaluate the effect of LTG on the trough concentration of VPA, 2-PGA, 3-keto-VPA, 3-OH-VPA, 4-ene-VPA, 4-OH-VPA in Chinese epilepsy patients. The result showed that there was no significant difference in the concentration of VPA and its five metabolites between patients in VPA monotherapy and patients in therapy combining VPA with LTG.