G1202Rを含むクリゾチニブ耐性変異体を克服するためのALKおよびROS1デュアル阻害剤としての新規2,4-ジアラミノピリミジン類似体の発見

新規の未分化リンパ腫キナーゼ（ALK）およびプロトオノコゲンチロシンタンパク質キナーゼROS（ROS1）デュアル阻害剤を探索することを目指しています。3-トリアゾール部分は、ALKWT（PDB 4MKC）を使用したセリチニブのコクシスタル構造に基づいて設計および合成され、ALKG1202Rを使用したセリチニブの結合モデル。細胞および酵素アッセイは、34C（WY-135）を有望なALK（IC50 = 1.4 nm）およびROS1（IC50 = 1.1 nm）デュアル阻害剤として、クリゾチニブおよびセリチニブよりも優れています。34Cは、ALK依存性細胞株Karpas299（IC50 = 21 nm）およびH2228（IC50 = 95 nm）、およびROS1陽性細胞株HCC78（IC50 = 40 nm）で有意に阻害活性を示しました。特に、34Cは、頻繁に観察されるさまざまなクリゾチニブ耐性変異体、特に「ゲートキーパー」変異と同定されたL1196M変異体（IC50 = 3.1 nm）に対して強力であり、すべての臨床的に耐性を付与するG1202R変異体（IC50 = 8.7 nm）として特定されました。段階アルク阻害剤。さらに、34Cは細胞アポトーシスを誘導し、細胞ALKおよびROS1活性を強く阻害することができました。さらに、ALKWT、ALKL1196M、およびALKG1202Rを使用した34Cの結合モデルは、SARS観測の構造塩基を提供しました。

Aiming to explore novel anaplastic lymphoma kinase (ALK) and proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS (ROS1) dual inhibitors to overcome crizotinib-resistant mutants, two series of 2,4-diarylaminopyrimidine (DAAP) analogues bearing thiazole or 1,2,3-triazole moieties were designed and synthesized based upon the cocrystal structure of ceritinib with ALKWT (PDB 4MKC) as well as the binding model of ceritinib with ALKG1202R. The cellular and enzymatic assays validated 34c (WY-135) as a promising ALK (IC50 = 1.4 nM) and ROS1 (IC50 = 1.1 nM) dual inhibitor superior to crizotinib and ceritinib. 34c showed significantly inhibitory activities on ALK-dependent cell lines KARPAS299 (IC50 = 21 nM) and H2228 (IC50 = 95 nM) as well as ROS1-positive cell line HCC78 (IC50 = 40 nM). In particular, 34c was potent against a variety of frequently observed crizotinib-resistant mutants, particularly the L1196M mutant (IC50 = 3.1 nM) identified as the "gatekeeper" mutation and the G1202R mutant (IC50 = 8.7 nM) which conferred resistance to all clinical stage ALK inhibitors. Furthermore, 34c was capable of inducing cell apoptosis and strongly inhibiting cellular ALK and ROS1 activity. In addition, the binding models of 34c with ALKWT, ALKL1196M and ALKG1202R provided structural bases for SARs observations.