E6H4抗体クローンを使用した口腔咽頭扁平上皮癌におけるP16免疫組織化学：最適希釈のための技術的方法研究

P16免疫組織化学（選択的HPV特異的検査使用を伴う）のルーチンテストは、口頭咽頭扁平上皮癌（OPSCC）の臨床診療に推奨されています。データは、E6H4クローンがこの目的に最適なパフォーマンスを発揮することを示唆していますが、OPSCCテストの最適な抗体濃度を評価した研究はありません。陽性のために70％を超える染色カットオフを持つ199人のOPSCC患​​者のコホートからの組織マイクロアレイを使用して、E6H4の一次抗体溶液の3つの濃度（希釈されていない、1：5、および1:10）を評価しました。一致は、パーセントの合意とコーエンのカッパを使用して評価されました。濃度は、高リスクHPV RNAでのin situハイブリダイゼーション（RNA-ISH）を使用して感度と特異性について評価され、Kaplan-Meier全生存分析とも相関していました。各濃度でのP16の結果と、RNAのin situハイブリダイゼーションでも、評価者間の一致が非常に高かった（すべての場合はP <0.0001）。P16の希釈と1：5の希釈（一致98.2％、カッパ0.943; P <0.0001）の間の一致は非常に高く、希釈されていないP16と1:10の希釈（合意79.2％;カッパ0.512; P <0.0001）の間ではるかに低かった。染色の強度は、希釈されていないものと比較して1：5および1:10の希釈で減少しましたが、テストの解釈やパフォーマンスを明らかに変更する方法ではありませんでした。結果は、E6H4抗体が、染色強度の軽度の低下、感度の最小低下、およびOPSCC患​​者の特異性の低下がない最大1：5の希釈でうまく機能することを示唆しています。これにより、試薬とコストの節約につながる可能性があります。

Routine testing for p16 immunohistochemistry (with selective HPV-specific test use) has been recommended for clinical practice in oropharyngeal squamous cell carcinoma (OPSCC). Data suggests that the E6H4 clone performs best for this purpose, yet no studies have evaluated the optimal antibody concentration for OPSCC testing. We evaluated three concentrations (undiluted, 1:5, and 1:10) of the primary antibody solution for E6H4 using tissue microarrays from a cohort of 199 OPSCC patients with a > 70% staining cutoff for positivity. Concordance was evaluated using percent agreement and Cohen's kappa. The concentrations were evaluated for sensitivity and specificity using high risk HPV RNA in situ hybridization (RNA-ISH) and also correlated with Kaplan-Meier overall survival analysis. Inter-rater agreement was very high between p16 results at each concentration and also with RNA in situ hybridization (p < 0.0001 for all). Agreement between p16 undiluted and 1:5 dilution (agreement 98.2%; Kappa 0.943; p < 0.0001) was very high and between p16 undiluted and 1:10 dilution (agreement 79.2%; Kappa 0.512; p < 0.0001) much lower. Intensity of the staining did decrease with the 1:5 and 1:10 dilutions compared to undiluted, but not in a manner that obviously would change test interpretation or performance. Results suggest that the E6H4 antibody performs well at dilutions of up to 1:5 fold with a minor decrease in staining intensity, minimum loss of sensitivity, and no loss of specificity in OPSCC patients. This could result in reagent and cost savings.