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目的：増殖、骨形成分化、およびヒトの歯髄幹幹細胞（HDPSC）の鉱化に対するグルタミン酸デヒドロゲナーゼ1（Glud1）の効果を調査する。 方法：HDPSCはin vitroで組織と実験法によって分離され、Shglud1レンチウイルスをトランスフェクトしてGlud1の発現をノックダウンしました。glud1の発現を検出するために、RT-PCRとウエスタンブロットを実行しました。CCK8アッセイを使用して、細胞増殖を評価しました。骨形成誘導培地を14日間培養した後、アリザリン赤染色を使用して、鉱化結節の形成を検出し、RT-PCRと免疫蛍光染色をそれぞれ実施して、それぞれRUNX2とOCNの発現を検出しました。データは、SPSS 20.0ソフトウェアパッケージで分析されました。 結果：Glud1の発現は、コントロールと比較して骨形成誘導後のHDPSCで有意に増加しました。Shglud1レンチウイルスをトランスフェクションした後、Glud1発現は有意に減少しました（P <0.05）。対照群と比較して、骨形成誘導後、Shglud1群で鉱化結節形成は有意に減少した。OCNの発現（骨形成分化の後期マーカー）はmRNAレベルとタンパク質レベルの両方で有意に減少しましたが、RUNX2（骨芽細胞分化の初期舞台マーカー）の発現はアップレギュレートされました。 結論：SHGLUD1は、in vitroでのHDPSCの骨形成分化の増殖、鉱化、および後期段階を阻害します。Glud1は、HDPSCの骨形成分化に重要な役割を果たす可能性があります。
目的：増殖、骨形成分化、およびヒトの歯髄幹幹細胞（HDPSC）の鉱化に対するグルタミン酸デヒドロゲナーゼ1（Glud1）の効果を調査する。 方法：HDPSCはin vitroで組織と実験法によって分離され、Shglud1レンチウイルスをトランスフェクトしてGlud1の発現をノックダウンしました。glud1の発現を検出するために、RT-PCRとウエスタンブロットを実行しました。CCK8アッセイを使用して、細胞増殖を評価しました。骨形成誘導培地を14日間培養した後、アリザリン赤染色を使用して、鉱化結節の形成を検出し、RT-PCRと免疫蛍光染色をそれぞれ実施して、それぞれRUNX2とOCNの発現を検出しました。データは、SPSS 20.0ソフトウェアパッケージで分析されました。 結果：Glud1の発現は、コントロールと比較して骨形成誘導後のHDPSCで有意に増加しました。Shglud1レンチウイルスをトランスフェクションした後、Glud1発現は有意に減少しました（P <0.05）。対照群と比較して、骨形成誘導後、Shglud1群で鉱化結節形成は有意に減少した。OCNの発現（骨形成分化の後期マーカー）はmRNAレベルとタンパク質レベルの両方で有意に減少しましたが、RUNX2（骨芽細胞分化の初期舞台マーカー）の発現はアップレギュレートされました。 結論：SHGLUD1は、in vitroでのHDPSCの骨形成分化の増殖、鉱化、および後期段階を阻害します。Glud1は、HDPSCの骨形成分化に重要な役割を果たす可能性があります。
PURPOSE: To investigate the effect of glutamate dehydrogenase 1 (GLUD1) on proliferation, osteogenic differentiation and mineralization of human dental pulp stem cells (hDPSCs). METHODS: hDPSCs were isolated by tissue-explant method in vitro, and shGLUD1 lentivirus was transfected to knock down the expression of GLUD1. RT-PCR and Western blot were performed to detect the expression of GLUD1. CCK8 assay was used to evaluate cell proliferation. After culture with osteogenic inducing medium for 14 days, alizarin red staining was used to detect the formation of mineralization nodules, and RT-PCR and immunofluorescence staining were performed to detect the expression of Runx2 and OCN, respectively. The data were analyzed with SPSS 20.0 software package. RESULTS: The expression of GLUD1 was significantly increased in hDPSCs after osteogenic induction compared with the control. After transfection with shGLUD1 lentivirus, GLUD1 expression was significantly decreased (P<0.05). Compared with the control group, mineralization nodule formation was significantly decreased in shGLUD1 group after osteogenic induction. The expression of OCN (late-staged markers for osteogenic differentiation) were significantly decreased both in mRNA and protein levels, while the expression of Runx2 (early-staged markers for osteoblast differentiation) was up-regulated. CONCLUSIONS: shGLUD1 inhibits the proliferation, mineralization and the late stage of osteogenic differentiation of hDPSCs in vitro. GLUD1 may play an important role in osteogenic differentiation of hDPSCs.
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