最適化されたプラズマ調製は、人間の血小板貯蔵分子を監視するために不可欠です

血小板は、顆粒内に多数の異なる分子を保存し、凝固だけでなく、血管新生、創傷治癒、炎症性疾患にも多くの経路を調節します。これらの分子は、活性化時に急速に放出されるため、血小板活性化のための簡単にアクセスできる間接マーカーを表します。血漿中の血小板由来分子の正確な分析には、in vitroの活性化とその後の血小板の脱顆粒を避けるために適切な抗凝固が必要であり、人為的に高レベルを引き起こし、翻訳研究内の生物学的に関連する違いをマスキングする可能性があります。しかし、不要な血小板の活性化を防ぐために使用される抗凝固剤の間にはまだ大きな不均一性があり、血小板顆粒の含有量について報告された血漿レベルは数桁にわたって範囲に及びます。この問題に対処し、処理中のin vitro血小板活性化を回避するための血漿調製の最も堅牢な方法を定義するために、ヒトの血液中の血液中の血液中の溶けたP-セレクチン（SCD62P）のトロンボスポンジン（TSP-1）、血小板因子4（PF4）、および可溶性P-セレクチン（SCD62P）の血漿濃度を比較しました。（CTAD）、酸 - 酸素 - デキストロース（ACD）、クエン酸塩、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）またはヘパリン。さらに、差次的に凝固したサンプル内の血液吸引とサンプル処理間の貯蔵温度と時間の影響を評価しました。私たちのデータは、ヘパリンまたはEDTAによる抗凝固療法がそれぞれPF4の血漿レベルの12.4倍または8.3倍の増加をもたらしたため、血小板貯蔵分子の血漿濃度を決定するための抗凝固剤としてのCTADの使用を強くサポートしています。ACDはCTADと類似していましたが、クエン酸塩は、血漿を4°Cに保持した場合にのみ、同等のPF4血漿レベルを示しました。さらに、抗凝固剤としてCTADを使用した血液サンプリングは、サンプルが周囲温度または6時間にわたって保管後に処理された場合でも、最も再現可能な値をもたらしました。後者の場合、ヘパリンまたはEDTAによる抗凝固療法により、in vitro血小板活性化を示す人工的に高い血漿レベルが得られました。したがって、血漿中の血小板保存分子の検出のための最適な抗凝固剤としてCTADを選択するための科学的認識を高めたいと考えています。

Platelets store a plethora of different molecules within their granules, modulating numerous pathways, not only in coagulation, but also in angiogenesis, wound healing, and inflammatory diseases. These molecules get rapidly released upon activation and therefore represent an easily accessible indirect marker for platelet activation. Accurate analysis of platelet-derived molecules in the plasma requires appropriate anticoagulation to avoid in vitro activation and subsequent degranulation of platelets, potentially causing artificially high levels and masking biologically relevant differences within translational research studies. However, there is still enormous heterogeneity among anticoagulants used to prevent unwanted platelet activation, so that plasma levels reported for platelet granule contents range over several orders of magnitude. To address this problem and to define the most robust method of plasma preparation to avoid in vitro platelet activation during processing, we compared plasma concentrations of the three platelet-stored factors thrombospondin (TSP-1), platelet factor 4 (PF4), and soluble P-selectin (sCD62P) between human blood samples anticoagulated with either citrate-theophylline-adenosine-dipyridamole (CTAD), acid-citrate-dextrose (ACD), citrate, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) or heparin. Additionally, we assessed the effect of storage temperature and time between blood drawing and sample processing within the differentially anticoagulated samples. Our data strongly support the use of CTAD as anticoagulant for determining plasma concentrations of platelet-stored molecules, as anticoagulation with heparin or EDTA led to a 12.4- or 8.3-fold increase in plasma levels of PF4, respectively. Whereas ACD was similar effective as CTAD, citrate only showed comparable PF4 plasma levels when plasma was kept at 4°C. Moreover, blood sampling with CTAD as anticoagulant resulted in the most reproducible values, even when samples were processed at ambient temperature or after storage over 6 hours. In the latter case, anticoagulation with heparin or EDTA led to artificially high plasma levels indicative of in vitro platelet activation. Therefore, we want to raise scientific awareness for choosing CTAD as optimal anticoagulant for the detection of platelet-stored molecules in plasma.