プラスミドPBMB26のミニリプリコンは、Bacillus cereusグループのメガプラスミドの新しい典型的なレプリコンを表しています

PBMB26の新しいミニレプリコン（Rep26ミニレプリコン）、胞子結晶関連（SCA）の表現型に関連する188 kbの固有のプラスミドYBT-020株の表現型が特徴付けられました。10個の推定オープンリーディングフレーム（ORF）をコードした12 kbのecoriフラグメントは、複製プローブベクターでクローン化されたときに複製をサポートすることができました。欠失およびフレームシフト変異解析により、B。thuringiensisのプラスミド複製には、2つの推定ORF（ORF21およびORF22）を含む4.1 kb領域が不可欠であることが示されました。ヘリックスターンヘリックスモチーフを備えた49.8 kDaタンパク質（Rep26と名付けられた）をコードする遺伝子ORF21は、82.6 kDaのタンパク質をコードする既知の複製タンパク質と遺伝子ORF22との相同性を示しませんでした。Rep26 Minirepliconの複製起点は、ORF21のコーディング領域に位置することが証明されました。プラスミドの安定性実験により、Rep26ミニレプリコンを含む組換えプラスミドが優れた分離安定性を持っていることが示されました。BLASTP分析により、ORF21およびORF22のアミノ酸配列がBacillus cereus群株の間でよく保存されていることが明らかになりました。Rep26ミニレプリコンは広く分布しており、B。cereusグループのメガプラスミドの新しい典型的なレプリコンとして定義できます。

A new minireplicon (rep26 minireplicon) from pBMB26, the 188 kb indigenous plasmid related to spore-crystal association (SCA) phenotype in Bacillus thuringiensis strain YBT-020, was characterized. A 12 kb EcoRI fragment, which encoded 10 putative open reading frames (ORFs), was capable of supporting replication when cloned in a replication probe vector. Deletion and frame shift mutation analysis showed that a 4.1 kb region encompassing two putative ORFs (orf21 and orf22) was essential for the plasmid replication in B. thuringiensis. Gene orf21 encoding a 49.8 kDa protein (named Rep26) with a helix-turn-helix motif showed no homology with known replication proteins and gene orf22 encoding a protein of 82.6 kDa showed homology to bacterial PcrA helicase. The replication origin of rep26 minireplicon was proved to be located in the coding region of orf21. Plasmid stability experiments indicated that the recombinant plasmid containing rep26 minireplicon has excellent segregational stability. BLASTP analysis revealed that amino acid sequences of ORF21 and ORF22 were well conserved among Bacillus cereus group strains. The rep26 minireplicon was widely distributed and could be defined as a new typical replicon in the megaplasmids of B. cereus group.