[核輸入のための阻害ペプチドを発現するベクターの構築と、ヘラ細胞の成長と移動への影響]

目的：核輸入のためのペプチドを阻害すると融合した赤蛍光タンパク質の発現ベクターを構築し（BIMAX）、BIMAXの位置と、HELA細胞の細胞増殖と移動に対するその潜在的な影響を調査します。 方法：核輸入用のペプチドを阻害する2種類のポリヌクレオチドをそれぞれ合成し、その後、ベクターPDS-RED-C1に挿入するためにアニールされました。組換えプラスミドを有能な細菌DH-5αにトランスフェクトしました。トランスフェクション後、DNAシーケンスのために陽性の細菌を拾い上げました。組換えプラスミドPDS-RED-BIMAX2、PDS-RED-BIMAX1および陰性プラスミドPDS-RED-C1は、Lipofectamine2000プロトコルに従ってそれぞれHELA細胞にトランスフェクトされました。トランスフェクション後、蛍光顕微鏡で赤蛍光タンパク質の発現と位置が観察されました。さらに、MTTアッセイと細胞移動アッセイを使用して、BIMAXトランスダクト細胞の増殖と移動を検出しました。 結果：DNAシーケンスは、Bimax1またはBimax2をコードするポリヌクレオチドがPDS-RED-C1ベクターに正常に挿入されることを示しました。HeLa細胞にトランスフェクトした後、阻害ペプチドは核に位置する赤蛍光タンパク質を誘導しました。さらに、融合タンパク質RFP-BIMAX1またはRFP-BIMAX2のいずれかが、HELA細胞の増殖と移動を抑制することができます。 結論：核輸入のためにペプチドを阻害する阻害と融合した赤蛍光タンパク質の発現ベクターが正常に構築されました。さらに、融合タンパク質を発現し、核内で存在し、腫瘍細胞の増殖と移動を抑制しました。

OBJECTIVE: To construct the expression vectors for red fluorescent protein fused with inhibiting peptides for nuclear import (Bimax),and explore the location of Bimax and its potential effects on cell proliferation and migration in HeLa cells. METHODS: Two kinds of polynucleotide encoding inhibiting peptides for nuclear import were synthesis respectively and subsequently annealed for inserting into vector pDs-Red-C1. The recombinant plasmids were transfected into competent bacterial DH-5α. After transfection,the positive bacteria were picked up for DNA sequencing. The recombinant plasmids pDs-Red-Bimax2,pDs-Red-Bimax1 and negative plasmid pDs-Red-C1 were transfected into HeLa cells respectively according to Lipofectamine2000 protocol. After transfection,the expression and location of red fluorescent protein were observed with fluorescence microscope. Furthermore,MTT assay and cell-migration assay were used to detect the proliferation and migration of Bimax transducted cells. RESULTS: DNA sequencing showed that the polynucleotides encoding Bimax1 or Bimax2 were inserted into pDs-Red-C1 vector successfully. After transfected into HeLa cells,the inhibiting peptide induced red fluorescent protein locating in nuclear. Furthermore,either the fusion protein RFP-Bimax1 or RFP-Bimax2 can suppress the proliferation and migration of HeLa cells. CONCLUSION: The expression vectors for red fluorescent protein fused with inhibiting peptides for nuclear import were successfully constructed. In addition,the fusion proteins were expressed and located in nuclear and suppressed the proliferation and migration of tumor cells.