[LPS刺激PMA分化THP-1細胞における炎症性細胞モデルの最適化と評価]

リポ多糖（LPS）刺激ホルボールエステル（PMA）拡散THP-1細胞から最適な炎症細胞モデルを開発し、抗炎症剤ホスホジエステラーゼ阻害剤ロリプラムに対するその反応を調査することを目的します。方法THP-1細胞をPMAによって分化し、LPSによって刺激して、ELISAによって検出された腫瘍壊死因子α（TNF-α）やインターロイキン6（IL-6）などの細胞上清の炎症因子を放出しました。PMAとLPS治療の両方の用量と持続時間は、炎症性細胞モデルを開発するために最適化されました。Rolipramは、PMA分化後にLPSとともに添加され、抗炎症剤に対する細胞の反応を評価しました。結果THP-1細胞は、24時間と48時間にわたってPMA治療の間に細胞形態に有意差は示されませんでしたが、LPS治療下で有意に高レベルのTNF-αとIL-6は放出されました。TNF-αレベルは、50 ng/mlでのPMAと比較して100 ng/mlでのPMAによる分化後に大幅に増加し、LPSの用量が抑制された方法で0.2μg/mL LPSのプラトーに増加しました。IL-6の分泌レベルは、THP-1細胞が100 ng/mLでPMAによって誘導され、LPS以上の1μg/mLで刺激されると著しく増加しました。100 ng/mLのPMAを使用し、0.5μg/mLのLPSを使用して作られた炎症性細胞モデルは、0.1μg/mL LPSと比較して、抗炎症剤ロリプラムに対してより敏感でした。結論100 ng/mLのPMAは、LPS刺激に対する応答性の向上とTHP-1細胞の分化のために選択されました。0.2μg/ml以上のLPSの刺激と組み合わせた100 ng/mLでのPMAの誘導によるTHP-1細胞は、TNF-αおよびIL-6の有意な分泌のための最適な炎症細胞モデルであり、これは敏感でした。抗炎症剤の作用。

Objective To develop an optimal inflammatory cell model from lipopolysaccharide (LPS)-stimulated phorbol ester (PMA)-differentiated THP-1 cells, and investigate its response to anti-inflammatory agent phosphodiesterase inhibitor rolipram. Methods THP-1 cells were differentiated by PMA and stimulated by LPS to release inflammatory factors in cell supernatants, like tumor necrosis factor α (TNF-α) and interleukin 6 (IL-6), which were detected by ELISA. The doses and durations of both PMA and LPS treatment were optimized to develop the inflammatory cell model. Rolipram was added along with LPS after PMA differentiation to assess the response of cells to the anti-inflammatory agent. Results THP-1 cells showed no significant differences in cell morphology between PMA treatment for 24 hours and for 48 hours, but significantly high levels of TNF-α and IL-6 were released under LPS treatment. TNF-α level increased significantly after the differentiation by PMA at 100 ng/mL in comparison with that at 50 ng/mL, and it increased in a LPS dose-depended manner untill a plateau at 0.2 μg/mL LPS; the secretion level of IL-6 increased remarkably when THP-1 cells were induced by PMA at 100 ng/mL and stimulated by LPS≥1 μg/mL. The inflammatory cell model made using PMA at 100 ng/mL and LPS at 0.5 μg/mL was more sensitive to the anti-inflammatory agent rolipram, compared with that by 0.1 μg/mL LPS. Conclusion PMA at 100 ng/mL was selected for the differentiation of THP-1 cells with the enhanced responsiveness to LPS stimulation; THP-1 cells by the induction of PMA at 100 ng/mL coupled with the stimulation of LPS at no less than 0.2 μg/mL was an optimal inflammatory cell model for significant secretion of TNF-α and IL-6, which was sensitive to the action of anti-inflammatory agents.