CRISPR/CAS9およびCRISピッチシステムを使用して、中国のハムスター卵巣細胞のHPRT遺伝子座へのSCFV-FC抗体遺伝子の標的ノックイン

中国のハムスター卵巣（CHO）細胞は、医薬品タンパク質の産生のための宿主細胞として使用されています。標的タンパク質の高く安定した産生のために、導入遺伝子は宿主細胞の適切なゲノム軌跡に統合する必要があります。ここでは、ノックインCHO細胞を生成しました。そこでは、ベクターバックボーンシーケンスのない導入遺伝子カセットが、定期的に互いに散在する短パリンドロミックリピート（CRISPR）/CAS9およびCRISPRを介した正確統合を標的染色体に使用してCHOゲノムのHPRT軌跡に統合されました。（CRIS-PITCH）システム。これらのシステムを使用して、トランスジェンのターゲットノックインの効率を調査しました。実用的な例として、ターゲットのために微小ホモロジーシーケンスによって媒介されるCRISピッチシステムを使用して、SCFV-FC抗体を生成するノックインCHO細胞を生成しました。CRISピッチシステムは、CHO Cell Engineeringのターゲットノックインを促進できることがわかりました。

Chinese hamster ovary (CHO) cells have been used as host cells for the production of pharmaceutical proteins. For the high and stable production of target proteins, the transgene should be integrated into a suitable genomic locus of host cells. Here, we generated knock-in CHO cells, in which transgene cassettes without a vector backbone sequence were integrated into the hprt locus of the CHO genome using clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 and CRISPR-mediated precise integration into target chromosome (CRIS-PITCh) systems. We investigated the efficiency of targeted knock-in of transgenes using these systems. As a practical example, we generated knock-in CHO cells producing an scFv-Fc antibody using the CRIS-PITCh system mediated by microhomology sequences for targeting. We found that the CRIS-PITCh system can facilitate targeted knock-in for CHO cell engineering.