タンパク質プライマー上のアルファ - グルカン合成タンパク質に縛られたアルファグルカンの形成のための再構成システム

タンパク質に結合したアルファグルカンの合成の2段階のメカニズムに関与するDEAEセルロース処理酵素を使用した再構成実験が実行されます。尿素/ドデシル硫酸ナトリウム/ポリアクリルアミドゲル再構成系によって合成された放射性生成物の電気泳動分析は、ゲルのアクリルアミド濃度との見かけの分子量が変化する非常にグルコシル化された標識帯域を示しています。2番目のステップ中に合成された長い炭水化物鎖は、最初のステップで形成されたグルコプロテインへのグルコシル部分の連続的な添加から生じます。脱グルコシル化実験により、再構成されたシステムの産物は、ベータアミラーゼ感受性グルコシル部分の添加により、反応1産物の38 kDaグルコシル化成分に由来することを確認します。私たちのデータは、特定のホスホリラーゼと澱粉合成酵素がジャガイモ塊に見られることを示唆しており、タンパク質結合グルカンの合成のためのプライマーとして反応1産物を利用できることを示唆しています。

Reconstitution experiments with the DEAE-cellulose-treated enzymes, engaged in a two-step mechanism of synthesis of alpha-glucan bound to protein, are performed. Urea/sodium dodecyl sulfate/polyacrylamide gel electrophoretic analysis of the radioactive products synthesized by the reconstituted system shows highly glucosylated, labeled bands, whose apparent molecular masses change with the acrylamide concentration in the gels. The long carbohydrate chains synthesized during the second step arise from the sequential addition of glucosyl moieties to the glucoprotein formed during the first step. A deglucosylation experiment confirms that the product of the reconstituted system originates from the 38-kDa glucosylated component of the reaction 1 product by the addition of beta-amylase-sensitive glucosyl moieties. Our data suggest that specific phosphorylases and starch synthetases are found in potato tuber, which are capable of utilizing reaction 1 product as primer for the synthesis of protein-bound glucan.