透過型電子顕微鏡分析のためのシュワン細胞培養物の保存、切断、および染色

透過型電子顕微鏡（TEM）は、in situ、培養細胞、または細胞またはナノ粒子などの他の材料の懸濁液に由来するペレットでの組織内の細胞および細胞外要素のユニークで価値のある検査を可能にします。ここでは、培養されたシュワン細胞またはシュワン細胞を含む背根神経節培養の調製に焦点を当てています。細胞の詳細の可能な限り生命のように獲得するには、細胞構造の優れた保存を達成することが不可欠です。この章で説明されている文化の準備の手順は、シュワン細胞、ミエリン、および基底層成分の最良の保存方法を見つけるための長年の蓄積されたTEM画像の結果を表しています。必要なすべての資料がリストされています。培養を修正、脱水、および埋め込む方法について説明します。文化の領域を選択して、それを採点し、樹脂が包まれた文化からそれを切り取って、それを適切に取り付けたり、断面したりし、半薄くて薄いセクションを実行することが詳細になります。TEMのセクションが染色される方法を説明すると、メソッドセクションが完了します。培養されたシュワン細胞とそのミエリンシースの保存は、培養皿に対する固定溶液を直接かつ迅速だが慎重に追加するために、顕著になる可能性があります。

The transmission electron microscope (TEM) enables a unique and valuable examination of cellular and extracellular elements in tissue in situ, in cultured cells, or in pellets derived from suspensions of cells or other materials such as nanoparticles. Here we focus on the preparation of cultured Schwann cells or Schwann cell-containing dorsal root ganglion cultures. To gain as life-like as possible views of the cellular details, it is imperative to achieve excellent preservation of the cellular structure. The steps in the preparation of cultures described in this chapter represent the results of many years of accumulated TEM images to find the best methods of preservation for Schwann cells, myelin, and basal lamina components. All the materials required are listed. The methods for fixing, dehydrating, and embedding a culture are described. Choosing an area in the culture to view, scoring it, cutting it out of the resin-embedded culture, mounting it appropriately for enface or cross-sectioning, and performing the semi-thin and thin sectioning are detailed. Explaining the way in which the sections are then stained for TEM completes the Methods section. Preservation of cultured Schwann cells and their myelin sheaths can be outstanding due to the direct and rapid but careful addition of the fixative solution to the culture dish.