低レベルの血小板活性化の凝固剤効果とコルヒチンによるその阻害

血小板は、特に細胞外小胞（EV）の放出と血栓症の役割を通じて、心血管疾患や癌などの疾患において重要な役割を果たします。血小板に対する抗炎症薬コルヒチンの効果はよく理解されていません。低レベルの活性化下での血小板からの凝固剤EVの放出に対するコルヒチンの効果を調査しました。健康なドナーからのクエン型血小板に富む血漿（PRP）を、穏やかな回転で37°Cで37°Cで37°Cで2 mMのコルヒチンまたはビヒクルとインキュベートしました。インキュベーション条件は、軽度の血小板活性化（CD62Pの発現および表面ラクタダリン結合の増加）を引き起こし、ホスファチジルセリン（PS、ラクタダヘリンの結合で測定）、CD61、CD62Pを発現するEVの放出を引き起こしました。インキュベーション条件により、フィブリン生成の遅延が短くなり、これはPS+/CD61+ EVのレベルの上昇と相関していました。血漿からのEVの除去は、全体的な止血電位（OHP）アッセイにおける血栓形成を廃止しました。コルヒチンは、PS+/CD61+とCD62P+ EVの両方のレベルを低下させ、血小板活性化によって達成されるフィブリン生成の短縮された遅延を廃止しました。同様の結果が、200 µMビンブラスチンとのPRPのインキュベーション後に観察され、微小管効果を示唆しています。血小板アゴニスト20 µM ADPまたは10 µMエピネフリンを使用した血小板活性化の代替方法もCD62P+ EVレベルを増加させ、これもコルヒチンとの事前のインキュベーションにより減衰しました。私たちの新しい発見は、コルヒチンによって阻害される低レベルの血小板活性化とEV形成の凝固剤効果を示しています。

Platelets play an important role in diseases such as cardiovascular disease and cancer, especially through their release of extracellular vesicles (EVs) and role in thrombosis. The effects of the anti-inflammatory drug colchicine on platelets are not well understood. We investigated the effect of colchicine on the release of pro-coagulant EVs from platelets under low-level activation. Citrated platelet-rich plasma (PRP) from healthy donors was incubated with 2 mM colchicine or vehicle at 37°C for 30 minutes with gentle rotation. The incubation conditions caused mild platelet activation (expression of CD62P and increased surface lactadherin binding) and release of EVs expressing phosphatidylserine (PS, measured by binding of lactadherin), CD61 and CD62P, both of which were attenuated by colchicine. The incubation conditions shortened the delay to fibrin generation and this correlated with elevated levels of PS+/CD61+ EVs. Removal of EVs from plasma abrogated clot formation in the overall haemostatic potential (OHP) assay. Colchicine decreased levels of both PS+/CD61+ and CD62P+ EVs and abrogated the shortened delay to fibrin generation achieved by platelet activation. Similar results were observed after incubation of PRP with 200 µM vinblastine, suggesting a microtubular effect. An alternative method of platelet activation using platelet agonists 20 µM ADP or 10 µM epinephrine also increased CD62P+ EV levels, and this too was attenuated by prior incubation with colchicine. Our novel findings demonstrate procoagulant effects of low-level platelet activation and EV formation which are inhibited by colchicine.